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腫瘍関連マクロファージ（TAM）の分析は、免疫療法に対するがんの再発と反応を予測する可能性が高い。ただし、TAMSの不均一性は、定量的および定性的測定に課題をもたらします。ここでは、免疫組織化学とフローサイトメトリーによって批判的に評価され、2つの一般的に使用されるパンマクロファージマーカー（CD14およびCD68）と、ヒト非微細胞Lung LungのM2マクロファージ（CD163、CD204、CD206、CD209の推奨マーカー）がん（NSCLC）。腫瘍、非癌性肺組織および血液が調査されました。免疫組織化学の場合、CD68は有用な汎マクロファージマーカーであることが確認されましたが、抗体の慎重な選択が重要であることがわかりました。広く使用されている抗CD68抗体クローンKP-1は、マクロファージと好中球の両方を染色します。これは、肺腫瘍に多くの好中球が含まれているため、TAMの定量化に問題があります。腫瘍切片でのTAMカウントについては、CD68のCD14、CD163、CD206などの細胞膜マーカーと組み合わせた標識を組み合わせてお勧めします。フローサイトメトリーでは、CD14とHLA-DRの一般的に使用される組み合わせは、一部のTAMがCD14を発現しないため、最適ではないことがわかりました。代わりに、CD68とHLA-DRの染色を組み合わせて、すべてのTAMをゲートするよりも望ましい。マクロファージの表現型マーカーに関して、スカベンジャー受容体CD163は、患者から患者への大きな変動を持つTAMのかなりの割合（50％-86％）によって発現することがわかった。TAMの約50％がCD206に対して陽性でした。驚くべきことに、CD163とCD206陽性の間に明確な重複はなく、NSCLC腫瘍で3つの異なるTAMサブポピュレーションが確認されました：CD163+ CD206+、CD163+ CD206-およびCD163- CD206-。この作業は、がんのためのマクロファージベースの予後ツールの開発に役立つはずです。
腫瘍関連マクロファージ（TAM）の分析は、免疫療法に対するがんの再発と反応を予測する可能性が高い。ただし、TAMSの不均一性は、定量的および定性的測定に課題をもたらします。ここでは、免疫組織化学とフローサイトメトリーによって批判的に評価され、2つの一般的に使用されるパンマクロファージマーカー（CD14およびCD68）と、ヒト非微細胞Lung LungのM2マクロファージ（CD163、CD204、CD206、CD209の推奨マーカー）がん（NSCLC）。腫瘍、非癌性肺組織および血液が調査されました。免疫組織化学の場合、CD68は有用な汎マクロファージマーカーであることが確認されましたが、抗体の慎重な選択が重要であることがわかりました。広く使用されている抗CD68抗体クローンKP-1は、マクロファージと好中球の両方を染色します。これは、肺腫瘍に多くの好中球が含まれているため、TAMの定量化に問題があります。腫瘍切片でのTAMカウントについては、CD68のCD14、CD163、CD206などの細胞膜マーカーと組み合わせた標識を組み合わせてお勧めします。フローサイトメトリーでは、CD14とHLA-DRの一般的に使用される組み合わせは、一部のTAMがCD14を発現しないため、最適ではないことがわかりました。代わりに、CD68とHLA-DRの染色を組み合わせて、すべてのTAMをゲートするよりも望ましい。マクロファージの表現型マーカーに関して、スカベンジャー受容体CD163は、患者から患者への大きな変動を持つTAMのかなりの割合（50％-86％）によって発現することがわかった。TAMの約50％がCD206に対して陽性でした。驚くべきことに、CD163とCD206陽性の間に明確な重複はなく、NSCLC腫瘍で3つの異なるTAMサブポピュレーションが確認されました：CD163+ CD206+、CD163+ CD206-およびCD163- CD206-。この作業は、がんのためのマクロファージベースの予後ツールの開発に役立つはずです。
The analysis of tumour-associated macrophages (TAMs) has a high potential to predict cancer recurrence and response to immunotherapy. However, the heterogeneity of TAMs poses a challenge for quantitative and qualitative measurements. Here, we critically evaluated by immunohistochemistry and flow cytometry two commonly used pan-macrophage markers (CD14 and CD68) as well as some suggested markers for tumour-promoting M2 macrophages (CD163, CD204, CD206 and CD209) in human non-small cell lung cancer (NSCLC). Tumour, non-cancerous lung tissue and blood were investigated. For immunohistochemistry, CD68 was confirmed to be a useful pan-macrophage marker although careful selection of antibody was found to be critical. The widely used anti-CD68 antibody clone KP-1 stains both macrophages and neutrophils, which is problematic for TAM quantification because lung tumours contain many neutrophils. For TAM counting in tumour sections, we recommend combined labelling of CD68 with a cell membrane marker such as CD14, CD163 or CD206. In flow cytometry, the commonly used combination of CD14 and HLA-DR was found to not be optimal because some TAMs do not express CD14. Instead, combined staining of CD68 and HLA-DR is preferable to gate all TAMs. Concerning macrophage phenotypic markers, the scavenger receptor CD163 was found to be expressed by a substantial fraction (50%-86%) of TAMs with a large patient-to-patient variation. Approximately 50% of TAMs were positive for CD206. Surprisingly, there was no clear overlap between CD163 and CD206 positivity, and three distinct TAM sub-populations were identified in NSCLC tumours: CD163+ CD206+ , CD163+ CD206- and CD163- CD206- . This work should help develop macrophage-based prognostic tools for cancer.
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