尿サンプル中のスタノゾロール-N-グルクロニドの分析のための高解像度質量分析と結合された単純なオンラインと同時の方法の開発と検証

スタノゾロールは、プロのスポーツで最も一般的に使用されている違法なアナボリックアンドロゲンステロイド（AAS）です。したがって、正確で高速な分析と長い検出ウィンドウは、解毒分析の分野に非常に興味深いものです。この作業では、スタノゾロール-N-グルクロニドの分析のために、液体クロマトグラフィー高解像度タンデム質量分析（HPLC-HRMSM）と組み合わせた非常にシンプルで高速で非常に高感度のオンライン固相抽出方法が開発されました。この完全に検証された手順は、サンプル準備におけるいくつかの手動手順（希釈と内部標準の追加）によってのみ特徴付けられます。75 pg/mLの識別制限（LOI）、高精度（87.1％-102.1％）、精度（3.1％-7.8％）、および感度が達成されました。さらに、良好な直線性（> 0.99）と堅牢性、および持ち越し効果は観察できませんでした。優れた確認分析パフォーマンスに加えて、この方法は未知の代謝物の識別と特性評価に十分な可能性を示しています。この方法を使用して、参照材料へのアクセスにより、ヒト尿中の1'N-および2'N-Stanozolol-グルクロニドの存在を初めて確認することができました。

Stanozolol is still the most commonly used illicit anabolic-androgenic steroid (AAS) in professional sports. Therefore, accurate and fast analysis and long detection windows are of great interest in the field of antidoping analysis. In this work, a very simple, fast, and highly sensitive online solid-phase extraction method coupled with liquid chromatography-high-resolution tandem mass spectrometry (HPLC-HRMSMS) for the analysis of stanozolol-N-glucuronides was developed. This fully validated procedure is characterized by only a few manual steps (dilution and addition of internal standard) in the sample preparation. A limit of identification (LOI) of 75 pg/mL, high accuracy (87.1%-102.1%), precision (3.1%-7.8%), and sensitivity was achieved. Furthermore, good linearity (> 0.99) and robustness, as well as no carry-over effects, could be observed. In addition to excellent confirmation analysis performance, this method shows sufficient potential for the identification and characterization of unknown metabolites. Using this method, it was possible to unambiguously confirm the presence of 1'N- and 2'N-stanozolol-glucuronide in human urine for the first time due to the access to reference material.