ジエチルピロネートを使用したモノクローナル抗体の共有標識/質量分析：タンパク質構造完全性を確保するための反応速度論

質量分析と一緒にジエチルピロカーボネート（DEPC）ベースの共有結合標識は、抗体治療の高次構造分析のための有望なツールです。ただし、標識中にタンパク質の構造的完全性が保存されている場合にのみ、抗体抗体に関する信頼できる情報を取得できます。この作業では、標識中にモノクローナル抗体（MAB）の構造的完全性を確保するためのDEPC反応速度論の適用性を評価しました。DEPC濃度の関数として選択されたタンパク質分解断片の修飾範囲を監視することにより、一般的なDEPC濃度を、高次構造を摂動せずに、定式化されたサンプルの異なるモノクローナル抗体に使用できることがわかります。これらの標識条件下では、抗体は構造的に摂動することなく最大4つのDEPC修飾に対応できることがわかり、マルチドメインタンパク質が以前に研究した単一ドメインタンパク質とは対照的に複数の標識に耐えることができることを示しています。このより広範な標識は、より敏感な構造の尺度を提供し、DEPCベースの共有結合標識質量分析をMABの高次構造分析に適しています。

Diethylpyrocarbonate (DEPC)-based covalent labeling together with mass spectrometry is a promising tool for the higher-order structural analysis of antibody therapeutics. Reliable information about antibody higher-order structure can be obtained, though, only when the protein's structural integrity is preserved during labeling. In this work, we have evaluated the applicability of DEPC reaction kinetics for ensuring the structural integrity of monoclonal antibodies (mAbs) during labeling. By monitoring the modification extent of selected proteolytic fragments as a function of DEPC concentration, we find that a common DEPC concentration can be used for different monoclonal antibodies in formulated samples without perturbing their higher-order structure. Under these labeling conditions, we find that the antibodies can accommodate up to four DEPC modifications without being structurally perturbed, indicating that multidomain proteins can withstand more than one label, which contrasts to previously studied single-domain proteins. This more extensive labeling provides a more sensitive measure of structure, making DEPC-based covalent labeling-mass spectrometry suitable for the higher-order structural analyses of mAbs.