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Cells2020Apr16Vol.9issue(4)

脂質RAFT成分の心臓は、ポリペプチド(NTCP)と相互作用し、胆汁塩の取り込みを調節します

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文献タイプ:
  • Journal Article
  • Research Support, Non-U.S. Gov't
概要
Abstract

タウロコール酸ナトリウムコトラン配流ポリペプチド(NTCP)は、肝細胞の基底外側膜で発現し、共役胆汁酸の取り込みを媒介し、B肝炎およびDウイルスの肝細胞侵入受容体を形成します。ここでは、NTCPの調節に役割を果たす可能性のある新しいタンパク質間相互作用を特定することを目指しました。この目的のために、NTCPはHAタグ付きHNTCP発現HEPG2細胞から沈殿し、塩化物チャネルのクリック様1(CLCC1)と気孔は、質量分析による相互作用タンパク質として同定されました。相互作用は、共免疫沈降によって確認されました。NTCP、CLCC1、および腹膜は、免疫蛍光、細胞表面ビオチン化、界面活性剤耐性膜の分離の組み合わせによって示されるように、脂質ラフトの原形質膜で発見されました。CLCC1の過剰発現もノックダウンもNTCP機能に影響を与えませんでした。しかし、気孔の過剰発現とノックダウンの両方がNTCPを介したタウロコール酸塩の取り込みを増加させましたが、原形質膜でのNTCPの存在量は、気孔枯渇細胞でのみ増加しました。これらの発見は、気孔をNTCPの相互作用因子として特定し、相互作用が胆汁塩輸送を調節することを示しています。

タウロコール酸ナトリウムコトラン配流ポリペプチド(NTCP)は、肝細胞の基底外側膜で発現し、共役胆汁酸の取り込みを媒介し、B肝炎およびDウイルスの肝細胞侵入受容体を形成します。ここでは、NTCPの調節に役割を果たす可能性のある新しいタンパク質間相互作用を特定することを目指しました。この目的のために、NTCPはHAタグ付きHNTCP発現HEPG2細胞から沈殿し、塩化物チャネルのクリック様1(CLCC1)と気孔は、質量分析による相互作用タンパク質として同定されました。相互作用は、共免疫沈降によって確認されました。NTCP、CLCC1、および腹膜は、免疫蛍光、細胞表面ビオチン化、界面活性剤耐性膜の分離の組み合わせによって示されるように、脂質ラフトの原形質膜で発見されました。CLCC1の過剰発現もノックダウンもNTCP機能に影響を与えませんでした。しかし、気孔の過剰発現とノックダウンの両方がNTCPを介したタウロコール酸塩の取り込みを増加させましたが、原形質膜でのNTCPの存在量は、気孔枯渇細胞でのみ増加しました。これらの発見は、気孔をNTCPの相互作用因子として特定し、相互作用が胆汁塩輸送を調節することを示しています。

The sodium taurocholate cotransporting polypeptide (NTCP) is expressed at the basolateral membrane of hepatocytes, where it mediates the uptake of conjugated bile acids and forms the hepatocyte entry receptor for the hepatitis B and D virus. Here, we aimed to identify novel protein-protein interactions that could play a role in the regulation of NTCP. To this end, NTCP was precipitated from HA-tagged hNTCP-expressing HepG2 cells, and chloride channel CLIC-like 1 (CLCC1) and stomatin were identified as interacting proteins by mass spectrometry. Interaction was confirmed by co-immunoprecipitation. NTCP, CLCC1 and stomatin were found at the plasma membrane in lipid rafts, as demonstrated by a combination of immunofluorescence, cell surface biotinylation and isolation of detergent-resistant membranes. Neither CLCC1 overexpression nor its knockdown had an effect on NTCP function. However, both stomatin overexpression and knockdown increased NTCP-mediated taurocholate uptake while NTCP abundance at the plasma membrane was only increased in stomatin depleted cells. These findings identify stomatin as an interactor of NTCP and show that the interaction modulates bile salt transport.

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