CSB、CSA、およびUVSSAの協同作用は、DNA損傷停止RNAポリメラーゼIIにTFIIHを標的としています

DNA損傷停止RNAポリメラーゼII（RNAPIIO）に対する反応には、アクティブに転写された鎖上の転写結合修復（TCR）複合体のアセンブリが含まれます。TCRタンパク質CSB、CSA、UVSSAの機能と、転写因子IIH（TFIIH）を含むコアDNA修復複合体が募集される方法はほとんど不明です。ここでは、ヒト同体ノックアウト細胞におけるTCR複合体のアセンブリメカニズムを定義します。TCRは、新たに特定されたCSA相互作用モチーフ（CIM）を介してCSAを募集するRNAPIIOに拘束されるCSBによって開始されることを示します。CSAは募集されると、UVSSAと停止したRnapiioとの関連を促進します。重要なことに、UVSSAは、CSBとCSAによって刺激される方法でTFIIH複合体を募集する重要な要因であることがわかりました。これらの発見は、TCRタンパク質の連続的かつ高度に協調的な組み立てメカニズムを特定し、修復を開始するためにDNA損傷停止RNAPIIOに対するTFIIHリクルートメントのメカニズムを明らかにします。

The response to DNA damage-stalled RNA polymerase II (RNAPIIo) involves the assembly of the transcription-coupled repair (TCR) complex on actively transcribed strands. The function of the TCR proteins CSB, CSA and UVSSA and the manner in which the core DNA repair complex, including transcription factor IIH (TFIIH), is recruited are largely unknown. Here, we define the assembly mechanism of the TCR complex in human isogenic knockout cells. We show that TCR is initiated by RNAPIIo-bound CSB, which recruits CSA through a newly identified CSA-interaction motif (CIM). Once recruited, CSA facilitates the association of UVSSA with stalled RNAPIIo. Importantly, we find that UVSSA is the key factor that recruits the TFIIH complex in a manner that is stimulated by CSB and CSA. Together these findings identify a sequential and highly cooperative assembly mechanism of TCR proteins and reveal the mechanism for TFIIH recruitment to DNA damage-stalled RNAPIIo to initiate repair.