リラグルチドは、HEPG2細胞のNRF2経路を活性化することにより、リポト毒性誘発性酸化ストレスを改善します

グルカゴン様ペプチド-1（GLP-1）アナログは、非アルコール性脂肪肝疾患（NAFLD）の酸化ストレスを抑制することが報告されていますが、NAFLDの効果的な治療剤は現在利用できません。したがって、この研究では、HEPG2細胞におけるリポ毒性誘発酸化ストレスに対するGLP-1類似体リラグルチドの保護効果を調査し、基礎となるメカニズムを解明することを目指しました。HepG2細胞を48時間培養し、FFA混合物とリラグルチドまたはFFA混合物、リラグルチド、およびエキセンディン（9-39）で培養し、遊離脂肪酸（FFA）混合物で処理しました。脂質蓄積は、オイルレッドO染色によって調べられました。酸化ストレスは、2 '、7'-ジクロロフルオレセインジアセテート、チオバルビツール酸 - 反応性物質を使用して細胞内反応性酸素種のレベルを測定することにより評価されましたが、抗酸化能力はスーパーオキシドジスムターゼとカタラーゼの活性を測定することにより評価されました。核因子エリスロイド-2関連因子2（NRF2）遺伝子と抗酸化酵素をコードする遺伝子の発現は、定量的RT-PCRを使用して分析されました。細胞および核NRF2の発現レベルは、免疫蛍光細胞染色とウエスタンブロッティングを使用して評価されました。リラグルチド治療は、高脂肪誘発性脂質形成と酸化ストレスマーカーのレベルを減らし、HepG2細胞の抗酸化酵素活性を増加させました。リラグルチド治療は、NRF2標的遺伝子のmRNA発現を増加させ、NRF2核転座を誘導し、NRF2 mRNA発現を変化させることなく核NRF2レベルを増加させました。総称して、これらの結果は、リラグルチドが、おそらくNRF2の調節と肝臓細胞の抗酸化酵素の発現を介して、リポト毒性誘発性酸化ストレスに対して保護効果を示すことを示しています。

Although glucagon-like peptide-1 (GLP-1) analogue has been reported to suppress oxidative stress in non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD), an effective therapeutic agent for NAFLD is currently unavailable. Therefore, in this study, we aimed to investigate the protective effects of the GLP-1 analogue liraglutide against lipotoxicity-induced oxidative stress in HepG2 cells and to elucidate the underlying mechanisms. HepG2 cells were cultured for 48 hours and treated with a free fatty acid (FFA) mixture: FFA mixture and liraglutide or FFA mixture, liraglutide, and exendin (9-39). Lipid accumulation was examined by oil red O staining. Oxidative stress was assessed by measuring the levels of intracellular reactive oxygen species using 2',7'-dichlorofluorescein diacetate and thiobarbituric acid-reactive substances, whereas antioxidant capacity was assessed by measuring the activity of superoxide dismutase and catalase. Expression of the nuclear factor erythroid-2-related factor 2 (NRF2) gene and the genes encoding antioxidant enzymes was analyzed using quantitative RT-PCR. Cellular and nuclear NRF2 expression levels were assessed using immunofluorescence cell staining and western blotting. Liraglutide treatment reduced high fat-induced lipid formation and the levels of oxidative stress markers and increased antioxidant enzyme activity in HepG2 cells. Liraglutide treatment increased the mRNA expression of NRF2 target genes, induced NRF2 nuclear translocation, and increased nuclear NRF2 levels without altering NRF2 mRNA expression. Collectively, these results indicate that liraglutide exhibits a protective effect against lipotoxicity-induced oxidative stress, possibly via modulation of NRF2 and expression of antioxidant enzymes in liver cells.