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不死化されたヒトのマイボム腺上皮細胞（HMGECS）の脂質分析は、マイボム腺機能障害を研究する前臨床モデルとして提案されています。3つの収穫技術に続いて中性脂質回復を評価し、HMGECの候補脂質バイオマーカーを特定するために、in vitro研究が実施されました。HMGECは、脂質産生を促進するために、血清含有培地で2日間培養されました。細胞を0.25％トリプシン - エチレンジアミン膜酢酸（EDTA）で採取するか、10 mM EDTAで採取したか、同時に2：1クロロホルム - メタノール（cm）で採取して抽出しました。修正されたフォルチ技術による抽出後、非極性相を処理し、エレクトロスプレーイオン化により5600質量分析計（SCIEX、フレーミングハム、米国、米国）に吹き込みました。MSおよびMS/MSALLスペクトルが取得されました。非極性コレステリルエステル（CES）はすべてのサンプルで一貫して検出されましたが、ワックスエステルはそうではありませんでした。収穫方法の間には、20のCEのうち2つにわずかな違いのみが検出されました。CMは、他の方法よりもCE18：1が少なくなりましたが、トリプシン-EDTAメソッドよりもCE20：4が大きくなりました（P <0.05すべての場合）。Human Meibumと同様に、炭素数（NC）≥24の非常に長鎖CESがすべてのサンプルで検出され、HMGEC脂質バイオマーカーとして機能する場合があります。ワックスエステルの欠如に対処するために、さらなる作業が必要です。全体として、3つの収穫方法は合理的に同等ですが、CMははるかに優れた効率を促進し、より高いスループットに推奨されます。
不死化されたヒトのマイボム腺上皮細胞（HMGECS）の脂質分析は、マイボム腺機能障害を研究する前臨床モデルとして提案されています。3つの収穫技術に続いて中性脂質回復を評価し、HMGECの候補脂質バイオマーカーを特定するために、in vitro研究が実施されました。HMGECは、脂質産生を促進するために、血清含有培地で2日間培養されました。細胞を0.25％トリプシン - エチレンジアミン膜酢酸（EDTA）で採取するか、10 mM EDTAで採取したか、同時に2：1クロロホルム - メタノール（cm）で採取して抽出しました。修正されたフォルチ技術による抽出後、非極性相を処理し、エレクトロスプレーイオン化により5600質量分析計（SCIEX、フレーミングハム、米国、米国）に吹き込みました。MSおよびMS/MSALLスペクトルが取得されました。非極性コレステリルエステル（CES）はすべてのサンプルで一貫して検出されましたが、ワックスエステルはそうではありませんでした。収穫方法の間には、20のCEのうち2つにわずかな違いのみが検出されました。CMは、他の方法よりもCE18：1が少なくなりましたが、トリプシン-EDTAメソッドよりもCE20：4が大きくなりました（P <0.05すべての場合）。Human Meibumと同様に、炭素数（NC）≥24の非常に長鎖CESがすべてのサンプルで検出され、HMGEC脂質バイオマーカーとして機能する場合があります。ワックスエステルの欠如に対処するために、さらなる作業が必要です。全体として、3つの収穫方法は合理的に同等ですが、CMははるかに優れた効率を促進し、より高いスループットに推奨されます。
The lipidomic analysis of immortalized human meibomian gland epithelial cells (HMGECs) has been proposed as a preclinical model to study meibomian gland dysfunction. An in vitro study was conducted to evaluate neutral lipid recovery following three harvesting techniques and to identify candidate lipid biomarkers of HMGECs. HMGECs were cultured in serum-containing media for two days to promote lipid production. Cells were either harvested by 0.25% trypsin-ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA), harvested by 10 mM EDTA, or simultaneously harvested and extracted by 2:1 chloroform-methanol (CM). After extraction by a modified Folch technique, the nonpolar phase was processed and infused into a TripleTOF 5600 mass spectrometer (Sciex, Framingham, MA, USA) with electrospray ionization. MS and MS/MSall spectra were acquired. Nonpolar cholesteryl esters (CEs) were consistently detected in all samples, while wax esters were not. Only small differences in two out of twenty CEs were detected between harvesting methods. CM yielded less CE18:1 than the other methods but greater CE20:4 than the trypsin-EDTA method (p < 0.05 for all). Similar to human meibum, very long-chain CEs with carbon number (nc) ≥ 24 were detected in all samples and may serve as HMGEC lipid biomarkers. Further work is needed to address the absence of wax esters. Overall, the three harvesting methods are reasonably equivalent, though CM promotes much better efficiency and is recommended for higher throughput.
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