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目的：この研究では、角膜上皮細胞によって分泌される色素上皮由来因子（PEDF）を定量化し、ドライアイ疾患のマウスモデル（DED）におけるその免疫調節機能を評価します。 方法：制御された環境チャンバーを14日間使用して、雌のC57BL/6マウスでDEDを誘導しました。RT-PCRとELISAを使用して、角膜上皮細胞（CEPC）によるSerpINF1遺伝子およびPEDFタンパク質合成のmRNA発現を定量化しました。正常またはDEDマウスのCEPCを24時間IFNγ刺激脱接細胞（DCS）で培養し、DCSによるMHC-IIおよびCD86の発現をフローサイトメトリーを使用して決定しました。次に、組換えPEDF（RPEDF）または抗PEDF抗体を共培養に追加し、上記の成熟マーカーのDC発現を定量化しました。最後に、DEDマウスを局所RPedF、抗PEDF ABまたはマウス血清アルブミン（MSA）、およびDC成熟、炎症誘発性サイトカインの発現、およびDED重症度のいずれかで治療しました。 結果：CEPCによるSERPINF1 mRNA発現とPEDFタンパク質産生レベルは、DEDで上方制御されました。DEDマウスのCEPCは、正常マウスと比較して、DCSによるMHC-IIおよびCD86の発現に抑制効果が高まることを示しました。この効果は、内因性PEDFを抗PEDF ABでブロックするか、RPEDFを補充することで強化することで廃止されました。抗PEDF抗体による治療は、内因性PEDFの効果とDC成熟の増加、結膜における炎症誘発性サイトカインの発現、およびDEDマウスの疾患の重症度を悪化させました。逆に、局所RPEDFは、DC成熟に対する内因性PEDFの抑制効果を高め、結合中の炎症誘発性サイトカインの発現を減少させ、疾患の重症度を低下させました。 結論：私たちの研究の結果は、DCの成熟を妨げるPEDFの役割を解明し、眼表面炎症の抑制を解明し、DEDの結果として角膜上皮障害を制限するPEDFの有望な治療可能性を説明します。
目的：この研究では、角膜上皮細胞によって分泌される色素上皮由来因子（PEDF）を定量化し、ドライアイ疾患のマウスモデル（DED）におけるその免疫調節機能を評価します。 方法：制御された環境チャンバーを14日間使用して、雌のC57BL/6マウスでDEDを誘導しました。RT-PCRとELISAを使用して、角膜上皮細胞（CEPC）によるSerpINF1遺伝子およびPEDFタンパク質合成のmRNA発現を定量化しました。正常またはDEDマウスのCEPCを24時間IFNγ刺激脱接細胞（DCS）で培養し、DCSによるMHC-IIおよびCD86の発現をフローサイトメトリーを使用して決定しました。次に、組換えPEDF（RPEDF）または抗PEDF抗体を共培養に追加し、上記の成熟マーカーのDC発現を定量化しました。最後に、DEDマウスを局所RPedF、抗PEDF ABまたはマウス血清アルブミン（MSA）、およびDC成熟、炎症誘発性サイトカインの発現、およびDED重症度のいずれかで治療しました。 結果：CEPCによるSERPINF1 mRNA発現とPEDFタンパク質産生レベルは、DEDで上方制御されました。DEDマウスのCEPCは、正常マウスと比較して、DCSによるMHC-IIおよびCD86の発現に抑制効果が高まることを示しました。この効果は、内因性PEDFを抗PEDF ABでブロックするか、RPEDFを補充することで強化することで廃止されました。抗PEDF抗体による治療は、内因性PEDFの効果とDC成熟の増加、結膜における炎症誘発性サイトカインの発現、およびDEDマウスの疾患の重症度を悪化させました。逆に、局所RPEDFは、DC成熟に対する内因性PEDFの抑制効果を高め、結合中の炎症誘発性サイトカインの発現を減少させ、疾患の重症度を低下させました。 結論：私たちの研究の結果は、DCの成熟を妨げるPEDFの役割を解明し、眼表面炎症の抑制を解明し、DEDの結果として角膜上皮障害を制限するPEDFの有望な治療可能性を説明します。
PURPOSE: In this study, we quantify Pigment Epithelium-derived Factor (PEDF) secreted by corneal epithelial cells and evaluate its immunomodulatory functions in a murine model of dry eye disease (DED). METHODS: We induced DED in female C57BL/6 mice using a controlled environment chamber for 14 days. We quantified mRNA expression of Serpinf1 gene and PEDF protein synthesis by corneal epithelial cells (CEpCs) using RT-PCR and ELISA. CEpCs from normal or DED mice were cultured with IFNγ-stimulated-dendritic cells (DCs) for 24 h, and expression of MHC-II and CD86 by DCs was determined using flow cytometry. Next, we either added recombinant PEDF (rPEDF) or anti-PEDF antibody to co-culture, and DC expression of the above maturation markers was quantified. Lastly, we treated DED mice with either topical rPEDF, anti-PEDF Ab or murine serum albumin (MSA), and DC maturation, expression of pro-inflammatory cytokines, and DED severity were investigated. RESULTS: Serpinf1 mRNA expression and PEDF protein production levels by CEpCs were upregulated in DED. CEpCs from DED mice exhibited an enhanced suppressive effect on the expression of MHC-II and CD86 by DCs, compared to normal mice. This effect was abolished by blocking endogenous PEDF with anti-PEDF Ab or enhanced by supplementing with rPEDF. Treatment with anti-PEDF antibody blocked the effect of endogenous-PEDF and increased DC maturation, expression of pro-inflammatory cytokines in conjunctivae, and exacerbated disease severity in DED mice. Conversely, topical rPEDF enhanced the suppressive effect of endogenous PEDF on DC maturation, decreased expression of pro-inflammatory cytokines in conjunctivae, and reduced disease severity. CONCLUSIONS: The results from our study elucidate the role of PEDF in impeding DC maturation, and suppression of ocular surface inflammation, explicating a promising therapeutic potential of PEDF in limiting the corneal epitheliopathy as a consequence of DED.
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