ドデシル硫酸ナトリウム - 硫酸 - ポリアクリルアミドゲル電気泳動および免疫ブロットのヒトIgGとそのサブクラスの電気泳動特性とそのサブクラス

凝集していない非還元ヒト免疫グロブリンG（IgG）は、ドデシル硫酸ナトリウム - ポリアクリルアミドゲル電気泳動（SDS-PAGE）に異常な見かけの分子量を示しました。主に、37度Cで変性した場合、8％ポリアクリルアミドを含むゲル上の190から240 kDaの見かけの分子量を持つ3つの異なるバンドとして移動しました。このバンディングパターンの生成には2つの理由があります。分子量と構造が異なる4つのIgGサブクラスから。（b）IgG1およびIgG2サブクラスのIgG骨髄腫タンパク質がダブレットとして移動し、IgG3とIgG4が主にわずかに異なる見かけの分子量を持つ1つのバンドを形成したため、バンドパターンの複雑さがさらに増加します。これらの特性は、研究されたすべての骨髄腫タンパク質の光鎖の種類とは無関係でした。ダブレットの生成は、モノクローナルタンパク質の不均一性を示唆しています。IgG1からの2つの分離可能なタンパク質集団は、還元に対する感受性が異なります。37度Cでの還元は、より大きな鎖に大きくなり、小さな種から重い鎖の二量体と軽鎖を生成しました。したがって、モノクローナルIgG1は、異なるS-S結合を持つ分子の少なくとも2つの亜集団で構成されている可能性があります。IgG2のダブレット形成は、両方の種が還元に等しく敏感であるため、説明されていないままです。SDS-PAGE上のIgGの異常な特性に関する知識は、細胞関連のIgGと交絡することなく、非還元細胞抗原から免疫ブロットを実行するための前提条件です。

Unreduced human immunoglobulin G (IgG) which was not aggregated showed anomalous apparent molecular masses on sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). It migrated mainly as three distinct bands with apparent molecular masses from 190 to 240 kDa on gels containing 8% polyacrylamide, when denatured at 37 degrees C. Generation of this banding pattern has two reasons: (a) the pattern is a superposition of bands originating from the four IgG subclasses that differ in molecular masses and structures; and (b) the complexity of the band pattern is further increased, because IgG myeloma proteins of the IgG1 and IgG2 subclass migrated as doublets, while IgG3 and IgG4 formed primarily one band with slightly different apparent molecular masses. These properties were independent of the type of light chain in all myeloma proteins studied. Generation of doublets suggests heterogeneities of monoclonal proteins. The two separable protein populations from IgG1 differ in their susceptibility to reduction. Reduction at 37 degrees C cleaved the larger into heavy and light chain, while it generated heavy chain dimer and light chain from the smaller species. Hence, it is possible that monoclonal IgG1 are comprised of at least two subpopulations of molecules with different S-S bonds. Doublet formation of IgG2 remains unexplained, since both species were equally sensitive to reduction. Knowledge on the anomalous properties of IgG on SDS-PAGE is a prerequisite to run immunoblots from unreduced cellular antigens without confounding cell-associated IgG with cellular antigens.