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ガスクロマトグラフィーマス分光法に基づく手順は、ポストモルテムのヒトrib骨のベンゾジアゼピン（ノルディアゼパム、オキサゼパム、ロルメタゼパム、クロナゼパム、ブロマゼパム、アルプラゾラム）の分析のために開発されました。骨髄を含む粉末骨サンプルは内部に残っており、内部標準のジアゼパム-D5を100μLのβ-グルコロニダーゼを含む酵素加水分解を受け、70°Cオーブンで水酸化ナトリウムで1時間インキュベートしました。サンプルは液相抽出を受け、酢酸エチルを溶離液として使用しました。クロマトグラフィーは融合シリカ毛細血管カラムで実施され、選択されたイオン監視モードが分析対象の決定に使用されました。この方法は、0.1-0.5 ng/mg（ベンゾジアゼピンに依存）の範囲で検証されました。回復の平均値、マトリックス効果、プロセス効率は83.2から94.3％、97.3から102.1％、80.5からの範囲でした。それぞれ91.2％まで。日中および日中の精度は15％未満でした。この手順は、これらのベンゾジアゼピンが血液中に発見された20症例からの日常的な検死中に得られたrib標本でテストされました。ベンゾジアゼピンは、症例の60％で骨と骨髄の結合サンプルで検出されました。ロラゼパムは、0.3-0.7 ng/mgの範囲の骨で検出され、1.3-4.2 ng/mgでノルディアゼパム1.1-1.2 ng/mgでオキサゼパムが検出されました。私たちの知る限り、これらのベンゾジアゼピンの同時分析のためのこのプロトコルは、人間のrib骨を使用して最初に実行および検証されています。
ガスクロマトグラフィーマス分光法に基づく手順は、ポストモルテムのヒトrib骨のベンゾジアゼピン（ノルディアゼパム、オキサゼパム、ロルメタゼパム、クロナゼパム、ブロマゼパム、アルプラゾラム）の分析のために開発されました。骨髄を含む粉末骨サンプルは内部に残っており、内部標準のジアゼパム-D5を100μLのβ-グルコロニダーゼを含む酵素加水分解を受け、70°Cオーブンで水酸化ナトリウムで1時間インキュベートしました。サンプルは液相抽出を受け、酢酸エチルを溶離液として使用しました。クロマトグラフィーは融合シリカ毛細血管カラムで実施され、選択されたイオン監視モードが分析対象の決定に使用されました。この方法は、0.1-0.5 ng/mg（ベンゾジアゼピンに依存）の範囲で検証されました。回復の平均値、マトリックス効果、プロセス効率は83.2から94.3％、97.3から102.1％、80.5からの範囲でした。それぞれ91.2％まで。日中および日中の精度は15％未満でした。この手順は、これらのベンゾジアゼピンが血液中に発見された20症例からの日常的な検死中に得られたrib標本でテストされました。ベンゾジアゼピンは、症例の60％で骨と骨髄の結合サンプルで検出されました。ロラゼパムは、0.3-0.7 ng/mgの範囲の骨で検出され、1.3-4.2 ng/mgでノルディアゼパム1.1-1.2 ng/mgでオキサゼパムが検出されました。私たちの知る限り、これらのベンゾジアゼピンの同時分析のためのこのプロトコルは、人間のrib骨を使用して最初に実行および検証されています。
A procedure based on gas chromatography-mass spectrometry was developed for the analysis of benzodiazepines (nordiazepam, oxazepam, lormetazepam, lorazepam, clonazepam, bromazepam and alprazolam) in postmortem human ribs. Powdered bone samples, including marrow remains inside, with the internal standard diazepam-d5 were subjected to enzymatic hydrolysis with 100 μL of β-glucoronidase and were incubated in sodium hydroxide for 1 h in a 70°C oven. Samples underwent liquid phase extraction and ethyl acetate was used as eluent. Chromatography was performed on a fused silica capillary column and the selected-ion-monitoring mode was used for analytes determination. The method was validated in the range 0.1-0.5 ng/mg (depending on the benzodiazepine) to 100 ng/mg with average values of recovery, matrix effect and process efficiency ranged from 83.2 to 94.3%, from 97.3 to 102.1% and from 80.5 to 91.2%, respectively. The intra- and inter-day accuracy was <15%. The procedure was tested in rib specimens obtained during routine autopsies from 20 cases where these benzodiazepines were found in blood. Benzodiazepines were detected in the combined bone and marrow samples in 60% of cases. Lorazepam was detected in bone in the range of 0.3-0.7 ng/mg, nordiazepam at 1.3-4.2 ng/mg and oxazepam at 1.1-1.2 ng/mg. To our knowledge, this protocol for the simultaneous analysis of these benzodiazepines is the first performed and validated using human ribs.
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