KIF3Aは、Eriocheir sinensisの精子形成中にβ-カテニンを輸送することにより、Wnt/β-カテニン経路を調節します

WNT/β-カテニン経路は、男性の生殖系の細胞増殖や分化など、多くの重要な生理学的イベントに関与しています。キネシン-2モーターKIF3Aは、エリオシアシネンシスの精子形成中に高度に発現することがわかりました。このプロセスでの貨物の細胞内輸送を潜在的に促進する可能性があります。しかし、断片上甲殻類の雄の生殖系におけるKIF3AとWNT/β-カテニン経路の関係に焦点を合わせている研究はわずかです。この研究では、E。sinensisのβ-カテニンのCDを初めてクローン化し、特徴付けました。蛍光in situハイブリダイゼーションと免疫蛍光の結果は、mRNAおよびタンパク質レベルでそれぞれES-KIF3AとES-β-カテニンの共局在を示した。ES-KIF3AのWnt/β-カテニン経路に対する調節機能をさらに調査するために、ES-KIF3Aは、in vivoで二本鎖RNA（dsRNA）およびE. sinensisの精巣の一次培養細胞によってノックダウンされました。結果は、ES-β-カテニンとES-DVLの発現がES-KIF3Aノックダウングループで減少したことを示しました。ES-β-カテニンのタンパク質発現レベルも減少し、ES-KIF3Aがノックダウンされたときに、精子形成の後期段階でES-β-カテニンの位置が核から細胞質に変化しました。その上、CO-IPの結果は、ES-KIF3AがES-β-カテニンと結合できることを実証しました。要約すると、この研究は、Es-Kif3aが精子形成中のWnt/β-カテニン経路を積極的に調節できることを示しており、Es-Kif3aはES-β-カテニンで結合してEs-β-カテニンの核移行を促進します。

The Wnt/β-catenin pathway participates in many important physiological events such as cell proliferation and differentiation in the male reproductive system. We found that Kinesin-2 motor KIF3A is highly expressed during spermatogenesis in Eriocheir sinensis; it may potentially promote the intracellular transport of cargoes in this process. However, only a few studies have focused on the relationship between KIF3A and the Wnt/β-catenin pathway in the male reproductive system of decapod crustaceans. In this study, we cloned and characterized the CDS of β-catenin in E. sinensis for the first time. Fluorescence in situ hybridization and immunofluorescence results showed the colocalization of Es-KIF3A and Es-β-catenin at the mRNA and the protein level respectively. To further explore the regulatory function of Es-KIF3A to the Wnt/β-catenin pathway, the es-kif3a was knocked down by double-stranded RNA (dsRNA) in vivo and in primary cultured cells in testes of E. sinensis. Results showed that the expression of es-β-catenin and es-dvl were decreased in the es-kif3a knockdown group. The protein expression level of Es-β-catenin was also reduced and the location of Es-β-catenin was changed from nucleus to cytoplasm in the late stage of spermatogenesis when es-kif3a was knocked down. Besides, the co-IP result demonstrated that Es-KIF3A could bind with Es-β-catenin. In summary, this study indicates that Es-KIF3A can positively regulate the Wnt/β-catenin pathway during spermatogenesis and Es-KIF3A can bind with Es-β-catenin to facilitate the nuclear translocation of Es-β-catenin.