フルクトース-1,6-ビスリン酸アルドラーゼのための堅牢で費用対効果の高い発光ベースのハイスループットアッセイA

低酸素固形腫瘍は、低酸素誘導因子1アルファ（HIF1α）の安定化を誘導し、多くの糖度溶解酵素と低酸素対応遺伝子の発現を刺激します。腫瘍が成長するためのエネルギーと材料のニーズをサポートする分解速度が高いことがサポートされます。フルクトース-1,6-ビスリン酸アルドラーゼA（alDOA）は、HIF1αの発現を促進する解糖経路の酵素です。したがって、AldoA活性の阻害は、2つの重要な癌生存メカニズムをブロックすることにより、さまざまな癌の潜在的な治療アプローチを表しています。ここでは、アルドア活性を決定するための発光ベースの戦略を提示します。アッセイプラットフォームは、以前に確立されたALDOAアクティビティアッセイを商用NAD/NADH検出キットと統合することにより開発され、以前のアッセイプラットフォームと比較して信号/背景（S/B）が大幅に改善されました。混合ベースの化合物ライブラリーを使用したスクリーニングキャンペーンは、Z '（> 0.8）とS/B（〜20）の優れた統計パラメーターを示し、ハイスループットスクリーニング（HTS）アプリケーションの堅牢性と準備を確認しました。このアッセイプラットフォームは、大規模なHTSキャンペーンを使用してALDOA阻害剤を特定するための費用対効果の高い方法を提供します。

Hypoxic solid tumors induce the stabilization of hypoxia-inducible factor 1 alpha (HIF1α), which stimulates the expression of many glycolytic enzymes and hypoxia-responsive genes. A high rate of glycolysis supports the energetic and material needs for tumors to grow. Fructose-1,6-bisphosphate aldolase A (ALDOA) is an enzyme in the glycolytic pathway that promotes the expression of HIF1α. Therefore, inhibition of ALDOA activity represents a potential therapeutic approach for a range of cancers by blocking two critical cancer survival mechanisms. Here, we present a luminescence-based strategy to determine ALDOA activity. The assay platform was developed by integrating a previously established ALDOA activity assay with a commercial NAD/NADH detection kit, resulting in a significant (>12-fold) improvement in signal/background (S/B) compared with previous assay platforms. A screening campaign using a mixture-based compound library exhibited excellent statistical parameters of Z' (>0.8) and S/B (~20), confirming its robustness and readiness for high-throughput screening (HTS) application. This assay platform provides a cost-effective method for identifying ALDOA inhibitors using a large-scale HTS campaign.