Ascaris Suumの腸細胞上のコリン作動性受容体およびレバミゾールによるNACHRの活性化

レバミゾールのようなコリン作動性アゴニストは、神経筋のニコチン性アセチルコリン受容体（NACHR）に選択的に作用することが知られている主要なクラスのkres骨薬物と、線虫麻痺の体細胞筋および神経に対応して、収縮と痙性麻痺を生成することが知られています。以前の研究では、筋肉や神経に見られるNACHRに加えて、線虫の寄生虫の興奮性組織にNACHRがあることが示唆されています。in situハイブリダイゼーションでRT-PCRとRNASCOPEを使用して、大きなブタ線虫であるAscaris Suumの腸の細胞におけるNACHRS発現の証拠を探し、細胞内のNACHRサブユニットのmRNAを検出しました。これらのサブユニットには、A。SuumMuscle：ASU-UNC-38、ASU-UNC-29、ASU-UNC-63、ASU-ACR-8の推定レバミゾール受容体の成分が含まれます。A. suum腸内のこれらのmRNAの相対的な発現は、QPCRによって定量化されました。また、Gタンパク質結合アセチルコリン受容体（ASU-GAR-1）の発現を探して発見しました。FLUO-3 AMを使用して、アセチルコリン（非選択的アゴニストとして）およびレバミゾール（L型NACHRアゴニストとして）による受容体活性化に応答して細胞内カルシウムの変化を検出し、腸内の機能性NACHRの証拠を探しました。アセチルコリンとレバミゾールの両方が細胞内カルシウムの増加を誘発するが、分離された腸組織のシグナルプロファイルが異なることを発見し、異なる受容体セットの活性化を示唆しています。レバミゾール反応は、A。suumのニコチン受容体拮抗薬であるメカミルアミンによってブロックされ、レバミゾールによるGタンパク質結合アセチルコリン受容体（GARS）ではなく腸NACHRSの活性化を示しています。腸の細胞でのNACHRの検出は、筋肉や神経の細胞に加えて、コリン作動性のkm骨の別の作用部位と、コリン作動性アンセルミン性の相乗的相互作用に寄与する可能性のある部位を明らかにしています。）。

Cholinergic agonists, like levamisole, are a major class of anthelmintic drugs that are known to act selectively on nicotinic acetylcholine receptors (nAChRs) on the somatic muscle and nerves of nematode parasites to produce their contraction and spastic paralysis. Previous studies have suggested that in addition to the nAChRs found on muscle and nerves, there are nAChRs on non-excitable tissues of nematode parasites. We looked for evidence of nAChRs expression in the cells of the intestine of the large pig nematode, Ascaris suum, using RT-PCR and RNAscope in situ hybridization and detected mRNA of nAChR subunits in the cells. These subunits include components of the putative levamisole receptor in A. suum muscle: Asu-unc-38, Asu-unc-29, Asu-unc-63 and Asu-acr-8. Relative expression of these mRNAs in A. suum intestine was quantified by qPCR. We also looked for and found expression of G protein-linked acetylcholine receptors (Asu-gar-1). We used Fluo-3 AM to detect intracellular calcium changes in response to receptor activation by acetylcholine (as a non-selective agonist) and levamisole (as an L-type nAChR agonist) to look for evidence of functioning nAChRs in the intestine. We found that both acetylcholine and levamisole elicited increases in intracellular calcium but their signal profiles in isolated intestinal tissues were different, suggesting activation of different receptor sets. The levamisole responses were blocked by mecamylamine, a nicotinic receptor antagonist in A. suum, indicating the activation of intestinal nAChRs rather than G protein-linked acetylcholine receptors (GARs) by levamisole. The detection of nAChRs in cells of the intestine, in addition to those on muscles and nerves, reveals another site of action of the cholinergic anthelmintics and a site that may contribute to the synergistic interactions of cholinergic anthelmintics with other anthelmintics that affect the intestine (Cry5B).