チオバルビツール酸反応物質アッセイを使用した生物学的サンプルにおける酸化ストレスの評価

分析の特異性と堅牢性が限られているにもかかわらず、チオバルビツール酸反応性物質 (TBARS) アッセイは、体液中の脂質過酸化の一般的な測定基準として広く使用されています。サンプルが適切に取り扱われ、保管されていれば、これは生物学的サンプル内の酸化ストレスのレベルを示す良い指標であると考えられています。このアッセイには、脂質過酸化生成物、主にマロンジアルデヒド (MDA) とチオバルビツール酸 (TBA) の反応が含まれ、これにより TBARS と呼ばれる MDA-TBA2 付加物の形成が引き起こされます。TBARS は赤ピンク色を呈し、532 nm で分光測光的に測定できます。TBARS アッセイは、酸性条件 (pH = 4) および 95 °C で実行されます。純粋な MDA は不安定ですが、これらの条件により、このメソッドで分析標準として使用される MDA ビス(ジメチル アセタール) から MDA が放出されます。TBARS アッセイは、約 2 時間で完了できる簡単な方法です。アッセイ試薬の調製については、ここで詳しく説明します。予算を重視する研究者は、1 つの標準曲線しか構築できない (したがって 1 つの実験にしか使用できない) 高価な TBARS アッセイ キットを購入するのではなく、これらの試薬を複数の実験に低コストで使用できます。この TBARS アッセイの適用性は、ヒト血清、低密度リポタンパク質、および細胞溶解物で示されています。アッセイは一貫性と再現性があり、1.1 μM の検出限界に到達できます。分光測光 TBARS アッセイの使用と解釈に関する推奨事項が提供されます。

Despite its limited analytical specificity and ruggedness, the thiobarbituric acid reactive substances (TBARS) assay has been widely used as a generic metric of lipid peroxidation in biological fluids. It is often considered a good indicator of the levels of oxidative stress within a biological sample, provided that the sample has been properly handled and stored. The assay involves the reaction of lipid peroxidation products, primarily malondialdehyde (MDA), with thiobarbituric acid (TBA), which leads to the formation of MDA-TBA2 adducts called TBARS. TBARS yields a red-pink color that can be measured spectrophotometrically at 532 nm. The TBARS assay is performed under acidic conditions (pH = 4) and at 95 °C. Pure MDA is unstable, but these conditions allow the release of MDA from MDA bis(dimethyl acetal), which is used as the analytical standard in this method. The TBARS assay is a straightforward method that can be completed in about 2 h. Preparation of assay reagents are described in detail here. Budget-conscious researchers can use these reagents for multiple experiments at a low cost rather than buying an expensive TBARS assay kit that only permits construction of a single standard curve (and thus can only be used for one experiment). The applicability of this TBARS assay is shown in human serum, low density lipoproteins, and cell lysates. The assay is consistent and reproducible, and limits of detection of 1.1 μM can be reached. Recommendations for the use and interpretation of the spectrophotometric TBARS assay are provided.