ヒトCD4+ T細胞でFOXP3発現を誘導する遺伝子編集は、安定した調節表現型と機能につながります

胸腺調節T細胞（TTREG）は、自己反応性免疫応答の強力な阻害剤であり、TREG機能の喪失は致命的な自己免疫疾患をもたらします。Treg数または機能の欠陥は、複数の自己免疫疾患にも関係しており、免疫耐性を確立するための細胞療法としてのTregの使用への関心の高まりにつながります。Tregは循環血液中に少ない数で存在し、浄化と拡大が困難であり、一部の被験者で本質的に欠陥がある可能性があるため、バルクCD4+ T細胞から自家Treg様細胞を作成するための代替戦略を設計しました。ホモロジー指向修復（HDR）ベースの遺伝子編集を使用して、FOXP3の発現を実施しました。これは、最初のコーディングエクソンエキソンのエピジェネティックサイレンシングに近いTREGエンハンサー/プロモーターを標的とするマスター転写因子であり、内生性発現の安定した堅牢な発現を許可します。FOXP3。HDR編集されたT細胞であるEdtregsは、炎症性疾患のモデルにおける生体内でのヒトおよびマウスEdTregsの両方の標準マーカーの持続的な発現とTREGの抑制活性につながる転写プログラムを示しました。さらに、このエンジニアリング戦略により、堅牢なin vitroおよびin vivo機能活性を備えた抗原特異的エドトレグの生成が可能になりました。最後に、エドトレグは臨床的に関連する方法を使用して、濃縮され、大規模に拡張することができました。一緒に、これらの発見は、Edtregの生産が幅広い将来の臨床応用を可能にする可能性があることを示唆しています。

Thymic regulatory T cells (tTregs) are potent inhibitors of autoreactive immune responses, and loss of tTreg function results in fatal autoimmune disease. Defects in tTreg number or function are also implicated in multiple autoimmune diseases, leading to growing interest in use of Treg as cell therapies to establish immune tolerance. Because tTregs are present at low numbers in circulating blood and may be challenging to purify and expand and also inherently defective in some subjects, we designed an alternative strategy to create autologous Treg-like cells from bulk CD4+ T cells. We used homology-directed repair (HDR)-based gene editing to enforce expression of FOXP3, the master transcription factor for tTreg Targeted insertion of a robust enhancer/promoter proximal to the first coding exon bypassed epigenetic silencing, permitting stable and robust expression of endogenous FOXP3. HDR-edited T cells, edTregs, manifested a transcriptional program leading to sustained expression of canonical markers and suppressive activity of tTreg Both human and murine edTregs mediated immunosuppression in vivo in models of inflammatory disease. Further, this engineering strategy permitted generation of antigen-specific edTreg with robust in vitro and in vivo functional activity. Last, edTreg could be enriched and expanded at scale using clinically relevant methods. Together, these findings suggest that edTreg production may permit broad future clinical application.