ノックアウトとマーカーフリーの蛍光原性chabaudiの生成のための拡張されたツールキット

げっ歯類の寄生虫プラズモジウムchabaudiは、マラリアのin vivoモデルで重要です。慢性感染症を引き起こす能力は、抗マチウム症の免疫の発生と、感染の急性期と慢性期の両方の間に寄生虫毒性に関連する特徴を調査するのに特に役立ちます。P. chabaudiはまた、培養における無性成熟（シゾゴニー）と赤血球の浸潤を受けているため、寄生虫の複製中に遺伝子機能と薬物活性を研究するための実験的に妥協できるin vitroモデルを提供します。このモデルの有用性を拡張するために、P。chabaudiのトランスフェクションプロトコルとプラスミドをさらに最適化し、薬物選択可能なマーカー遺伝子を含まない安定した蛍光系統を生成しました。これらの母性は、マウスと蚊のライフサイクル全体で野生型寄生虫と同じ感染力学を示しています。さらに、それらの病原性は、連続血液の通過によって増加し、蚊の感染によってリセットされる可能性があります。また、別のげっ歯類のマラリア寄生虫の実験的遺伝学のスケールに革命をもたらし、これらを使用してバーコードされたP. chabaudi遺伝子削除と蛍光P. chabaudi母親の翻訳のためのタグ付けベクターを生成するために、大規模で線形の形質型のベクトルを適応させました。- ライン。これにより、P。chabaudiライン、ベクター、トランスフェクションのアプローチのツールキットが生成され、これは研究コミュニティにとって幅広い有用性になります。

The rodent parasite Plasmodium chabaudi is an important in vivo model of malaria. The ability to produce chronic infections makes it particularly useful for investigating the development of anti- Plasmodium immunity, as well as features associated with parasite virulence during both the acute and chronic phases of infection. P. chabaudi also undergoes asexual maturation (schizogony) and erythrocyte invasion in culture, so offers an experimentally-amenable in vivo to in vitro model for studying gene function and drug activity during parasite replication. To extend the usefulness of this model, we have further optimised transfection protocols and plasmids for P. chabaudi and generated stable, fluorescent lines that are free from drug-selectable marker genes. These mother-lines show the same infection dynamics as wild-type parasites throughout the lifecycle in mice and mosquitoes; furthermore, their virulence can be increased by serial blood passage and reset by mosquito transmission. We have also adapted the large-insert, linear PlasmoGEM vectors that have revolutionised the scale of experimental genetics in another rodent malaria parasite and used these to generate barcoded P. chabaudi gene-deletion and -tagging vectors for transfection in our fluorescent P. chabaudi mother-lines. This produces a tool-kit of P. chabaudi lines, vectors and transfection approaches that will be of broad utility to the research community.