液体クロマトグラフィー高解像度質量分析（LC-HRMS）を使用した牛乳中のペプチド抗生物質残基の分析

ウバインミルクの残留ペプチド抗生物質（バカトラシンA、コリスチンAおよびB、バージナイシンM1およびS1）の残留ペプチド抗生物質の測定について、液体クロマトグラフィハイ分解能質量分析（LC-HRMS）メソッドが開発および検証されました。LC-HRMSの正確な質量データは、広範なサンプル調製なしに残留レベルの牛乳中のこれらの重要な抗生物質を定量化および識別するために必要な選択性と感度を提供しました。ペプチドの回収率を改善するために、0.06％トリフルオロ酢酸を加えて、アセトニトリル中の0.3％ギ酸を使用して乳サンプルを抽出しました。サンプルのクリーンアップは、蒸発し、ギ酸/水アセトニトリル混合物で再構成された抽出物のアリコートで最小限でした。LC分離は、ペプチド分析物のピーク形状と再現性を改善するために、勾配内の0.3％ギ酸で行われました。フルスキャンMS1データ収集とその後の全イオン燃化を備えた四重軌道HRMS機器を使用して、前駆体および確認産物イオンの正確な質量を取得しました。LC-HRMSの利点の1つは、異なる電荷状態または付加物を含む複数の前駆体イオンの組み合わせが定量化に使用できることです。この方法は、3種類のウシ牛乳で12.5〜200 ng/gの範囲の4つの濃度レベルで検証されました。バチトラシンA、コリスチン、およびエンラマイシンの場合、溶媒標準と比較した平均回収率は70％から120％の範囲でした。牛乳抽出物中のバージニアマイシン残基の平均回収率は、溶媒標準を使用して容認できないほど高い（最大138％）でしたが、マトリックスに合併したキャリブレーションを使用した回収率は90〜115％であると判断されました。コリスチンに内部標準補正が使用された場合、マトリックス効果は他の分析物で25％未満であることがわかりました。日中の相対標準偏差は一般に15％を下回っていました。牛乳中のペプチド抗生物質残基のメソッド検出限界（0.5〜5.5 ng/g）は、調節レベルの懸念をはるかに下回っていました。

A liquid chromatography-high resolution mass spectrometry (LC-HRMS) method was developed and validated for the determination of residual peptide antibiotics (bacitracin A, colistin A and B, enramycin A and B, virginiamycin M1 and S1) in bovine milk. LC-HRMS accurate mass data provided the necessary selectivity and sensitivity to quantitate and identify these important antibiotics in milk at residue levels without extensive sample preparation. Milk samples were extracted using 0.3% formic acid in acetonitrile with 0.06% trifluoroacetic acid added to improve peptide recoveries. Sample clean-up was minimal with an aliquot of the extract evaporated and reconstituted in a formic acid/water-acetonitrile mixture and then filtered. LC separation was performed with 0.3% formic acid in the gradient to improve the peak shape and reproducibility of the peptide analytes. A Quadruple-Orbitrap HRMS instrument with full-scan MS1 data collection followed by all-ion-fragmentation was used to obtain the exact mass of the precursor and confirmatory product ions. One advantage of LC-HRMS is that a combination of multiple precursor ions, including different charge states or adducts, can be used for quantification. The method was validated at four concentration levels ranging from 12.5 to 200 ng/g in three types of bovine milk. For bacitracin A, colistins and enramycins, the average recoveries compared to solvent standards ranged between 70% and 120%. Average recoveries for virginiamycin residues in milk extracts were unacceptably high (up to 138%) using solvent standards, but recoveries using matrix-matched calibration were determined to be 90-115%. Matrix effects were found to be less than 25% for the other analytes when internal standard correction was used for the colistins. Intra-day relative standard deviations were generally below 15%. The method detection limits for the peptide antibiotic residues in milk (0.5 to 5.5 ng/g) were well below regulatory levels of concern.