共焦点顕微鏡によるsiRNAの細胞内処理の運動分析

ここでは、自動化された顕微鏡コントロールと画像習得を使用して複合体を含む小さな干渉RNA（siRNA）の細胞内処理を追跡して、ユーザーの努力と時間を最小限に抑える方法について説明します。この技術は、蛍光の共局在化を使用して、初期/後期エンドソーム、高速/遅いリサイクルエンドソーム、リソソーム、小胞体を含むさまざまな細胞内位置でシリカナノ粒子によって送達される二重標識蛍光siRNAを監視します。siRNAの時間的関連性を各細胞内位置と組み合わせて、siRNA処理で使用される細胞内経路を再構築し、送達媒体の化学組成に基づいてこれらの経路がどのように変化するかを示しました。

Here, we describe a method for tracking intracellular processing of small interfering RNA (siRNA) containing complexes using automated microscopy controls and image acquisition to minimize user effort and time. This technique uses fluorescence colocalization to monitor dual-labeled fluorescent siRNAs delivered by silica nanoparticles in different intracellular locations, including the early/late endosomes, fast/slow recycling endosomes, lysosomes and the endoplasmic reticulum. Combining the temporal association of siRNAs with each intracellular location, we reconstructed the intracellular pathways used in siRNA processing, and demonstrate how these pathways vary based on the chemical composition of the delivery vehicle.