共有結合凝集の増強タンパク質総硫酸ナトリウム（CE-SHS）を使用した非還元毛細血管ゲル電気泳動によるタンパク質治療薬の定量化

ドデシル硫酸ナトリウム（CGE-SDSまたはCE-SDS）を使用した毛細血管ゲル電気泳動（CGE）は、製造プロセスの最適化中の複雑な治療の純度を評価し、商業的リリースと安定性テストのために、バイオテクノロジー産業で一般的に使用されています。しかし、治療タンパク質MAB-1およびMAB-2の場合、非還元（NR）CE-SDSは、サイズの除外クロマトグラフィーなど、他の相補的な方法によって報告された純度と比較して見かけの純度を大幅に低下させたと予想される％凝集よりも高くなりました（SEC）。さらに、凝集レベルに対する強いタンパク質負荷依存性が観察され、真の純度値の合理的な評価が妨げられました。解決策は、SDSをシービングゲルバッファーマトリックスに比較的疎水性洗剤硫酸ナトリウム（SHS）を補充することでした。分析的超遠心分離（AUC）を使用して、SECの結果の精度を確認しました。この作業は、CGEアプリケーションでSDS以外の洗剤を使用することが商業生物学的分野で価値があることを強調し、CGEデータの精度を確認するためにSECを使用する方法の例を提供しました。

Capillary gel electrophoresis (CGE) using sodium dodecyl sulfate (CGE-SDS or CE-SDS) is commonly used in the biotechnology industry to assess the purity of a complex therapeutic during manufacturing process optimization and also for commercial release and stability testing. However, for therapeutic proteins mAb-1 and mAb-2, non-reducing (NR) CE-SDS yielded higher than expected % aggregate which considerably lowered its apparent purity relative to the purity reported by other complementary methods, such as Size Exclusion Chromatography (SEC). Furthermore, a strong protein load dependence on aggregate levels was observed which prevented any reasonable assessment of the true purity value. The solution was to supplement SDS with the relatively hydrophobic detergent sodium hexadecyl sulfate (SHS) in the sieving gel buffer matrix which virtually eliminated the protein load-dependence and reduced the % aggregate value to expected levels when compared to SEC. Analytical Ultracentrifugation (AUC) was used to help confirm the accuracy of the SEC results. This work underscored how using detergents other than SDS in CGE applications can be valuable in the commercial biologics space and provided an example of how SEC can be used to confirm the accuracy of CGE data.