CFTR mRNAを早期停止コドンで編集するためのツールとしてRepaistV2を調査する

嚢胞性線維症（CF）は、膜貫通コンダクタンスレギュレーター（CFTR）タンパク質をコードする遺伝子の変異によって引き起こされます。一部のCF患者は、CFTR遺伝子のナンセンス変異に対して化合物ヘテロ接合またはホモ接合体です。これは、切り捨てられたCFTRタンパク質とより重症の疾患の原因となる早期終了コドン（PTC）の転写産物に存在することを意味します。アミノグリコシドとPTC124誘導体は、PTCの読み取りスルーに使用され、全長CFTRタンパク質を回復しています。ただし、精密医療フレームワークでは、CRISPR/DCAS13Bベースの分子ツール「RepairV2」（プログラム可能なAからIの交換、バージョン2のRNA編集）は、全長CFTRタンパク質を回復するための優れた代替手段になる可能性があります。このRNA編集アプローチは、DCAS13Bタンパク質に融合したHadAR2酵素のデアミナーゼドメインのターゲティングに基づいて、変異体mRNAでイノシンに編集される特定のアデノシンに編集されています。ターゲティング特異性は、ガイドRNA（GRNA）によって標的領域に相補的に許可され、DCAS13Bタンパク質によって認識されます。ここでは、RepaisV2プラットフォームを使用して、UGA PTCをさまざまな細胞タイプ、つまりIB3-1細胞、HELA、およびFRT細胞にそれぞれUGGに編集し、H2BGFPOPALとCFTRW1282Xをそれぞれ発現させました。

Cystic fibrosis (CF) is caused by mutations in the gene encoding the transmembrane conductance regulator (CFTR) protein. Some CF patients are compound heterozygous or homozygous for nonsense mutations in the CFTR gene. This implies the presence in the transcript of premature termination codons (PTCs) responsible for a truncated CFTR protein and a more severe form of the disease. Aminoglycoside and PTC124 derivatives have been used for the read-through of PTCs to restore the full-length CFTR protein. However, in a precision medicine framework, the CRISPR/dCas13b-based molecular tool "REPAIRv2" (RNA Editing for Programmable A to I Replacement, version 2) could be a good alternative to restore the full-length CFTR protein. This RNA editing approach is based on the targeting of the deaminase domain of the hADAR2 enzyme fused to the dCas13b protein to a specific adenosine to be edited to inosine in the mutant mRNA. Targeting specificity is allowed by a guide RNA (gRNA) complementarily to the target region and recognized by the dCas13b protein. Here, we used the REPAIRv2 platform to edit the UGA PTC to UGG in different cell types, namely IB3-1 cells, HeLa, and FRT cells engineered to express H2BGFPopal and CFTRW1282X, respectively.