CAS9のカットと結果。CRISPR/CAS9のオンおよびオフターゲット損傷の検出、予測、および緩和：CAS9編集のオンターゲットおよびオフターゲット効果を検出、予測、および軽減するための技術

大規模な削除とゲノムの再配置は、定期的に散在する短いパリンドロームリピート - CRISPR関連タンパク質9（CRISPR/CAS9）オンターゲットサイトで、二本鎖切断修復の一般的な産物としてますます認識されています。CAS9ターゲットの誤認識からの有名なターゲット編集製品とともに、これらは重要な制限であり、対処する必要があります。CAS9編集された細胞線およびモデル生物で観察された表現型の妥当性を確保するために、Cas9編集の厳密な評価が必要です。ここでは、Cas9特異性のメカニズム、およびCas9編集の不要な効果を評価および軽減する戦略がレビューされています。ガイド-RNA設計、RNA修飾、CAS9修正、Cas9活性の制御をカバーします。オフターゲットの計算予測、およびCas9切断を検出するための実験方法。CAS9編集のオンターゲットおよびオフターゲット効果の有病率の認識は近年増加していますが、遺伝子編集コミュニティ全体でのより広範な取り込みは、多様な用途と生物全体でのCAS9の特異性を決定する上で重要です。

Large deletions and genomic re-arrangements are increasingly recognized as common products of double-strand break repair at Clustered Regularly Interspaced, Short Palindromic Repeats - CRISPR associated protein 9 (CRISPR/Cas9) on-target sites. Together with well-known off-target editing products from Cas9 target misrecognition, these are important limitations, that need to be addressed. Rigorous assessment of Cas9-editing is necessary to ensure validity of observed phenotypes in Cas9-edited cell-lines and model organisms. Here the mechanisms of Cas9 specificity, and strategies to assess and mitigate unwanted effects of Cas9 editing are reviewed; covering guide-RNA design, RNA modifications, Cas9 modifications, control of Cas9 activity; computational prediction for off-targets, and experimental methods for detecting Cas9 cleavage. Although recognition of the prevalence of on- and off-target effects of Cas9 editing has increased in recent years, broader uptake across the gene editing community will be important in determining the specificity of Cas9 across diverse applications and organisms.