年齢と胚盤胞球の染色体倍数性の関係は、非侵襲的前麻痺遺伝子検査によって分析されました（NIPGT-A）

目的：NIPGT-Aによって確立されたヒト胚盤球染色体倍数性と年齢の増加との関係を評価する。 方法：これは、発生学者がトレーニングを取得し、NIPGT-Aの以前の使用で結果を検証した後、10の補助補充センターによって実施された前向き多施設研究です。母性年齢、男性因子、繰り返し移植の繰り返し、再発性中絶、またはNIPGT-Aを要求したため、NIPGT-Aの兆候がある合計94人のカップルがこの研究に含まれていました。カップルには核型の異常はありませんでした。ICSIの後、胚は、6〜7％CO2および5-20％O2インキュベーターの大気中の37°Cで、それぞれ1つまたは2つのステップ培養システム、単一または連続培地を使用して胚盤胞段階まで培養しました。3日目に、切断胚を再評価して積倍細胞を除去しました。次に、胚を個々のウェルで培養し、20µlの培地を胚盤胞段階に達するまで培養した。胚盤胞をガラス化し、液体窒素に保存しました。その後、使用済み胚盤胞培地（20µL）をPCRチューブに移し、遺伝子検査室で分析のために送信し、そこでシーケンスまで-80°Cで保存されました。5日/6日目に、使用済み胚盤胞培地の合計243個のサンプルが収集されました。培地上に分泌される細胞のないDNAは、MALBAC技術に基づいて、NICSサンプル準備キット（Yikon Genomics）を使用して増幅されました。全ゲノム増幅後、DNAはqubit 2.0フルオロメーターを使用して測定され、illuminamiseq®プラットフォームを使用して次世代シーケンス（NGS）を受けました。データは、Chromgo®ソフトウェア（Yikon Genomics）を使用して分析されました。 結果：患者の平均年齢は38±4.08歳で、20〜44歳の間隔でした。ハプロイドは、36.4％（80/220）の症例、31.3％（69/220）で異数性があり、32.3％（71/220; 60％以上の異数性）のモザイシズムで診断されました。モザイクの値は、年齢層が異なると29.8％から33.8％の範囲でした。個別に、最も頻繁な染色体異常は、18例で発生したXXY（Klinefelter症候群）であり、その後8例で染色体21（トリソミー/モノソミー）が続きました。NIPGT-Aデータは、染色体モザシズムのすべての症例で異数性細胞の60％以上の発生率を示しました（n = 71）。 結論：異数性細胞を使用した高度なモザイク主義が検出され、このデータに対していくつかの仮説が示唆されました（染色体異常現象の自己修正を検出する際のNIPGT-A感度）。しかし、年齢とともに著しく変化しませんでした。一方、総数レベルは年齢と負の相関があり、異数性レベルには正の関係がありました。これは、NIPGT-Aおよび患者年齢の増加を使用した胚盤胞の染色体倍数性を関連付ける文献の最初の報告です。

OBJECTIVE: To assess the relationship between human blastocyst chromosomal ploidy established by niPGT-A and increasing age. METHODS: This is a prospective multicenter study carried out by ten assisted reproduction centers after their embryologists acquired training and validated their results with the previous use of niPGT-A. A total of 94 couples with indication for niPGT-A due to increase maternal age, male factor, repeated implantation failures, recurrent abortion or because they requested niPGT-A were included in this study. The couples had no karyotype abnormalities. After ICSI, the embryos were cultured until blastocyst stage using one or two step culture systems, single or sequential media respectively, at 37°C in an atmosphere of 6-7% CO2 and 5-20% O2 incubators. On day 3, we re-evaluated cleavage embryos to complete cumulus cells removal. The embryos were then cultured in individual well, with 20µl of medium under oil until they reached blastocyst stage. The blastocysts were vitrified and stored in liquid nitrogen. After that, the spent blastocyst culture medium (20µl) was transferred to a PCR tube and sent for analysis in the genetic laboratory, where it was stored at -80°C until sequencing. A total of 243 samples of spent blastocyst culture medium were collected on the 5th/6th day. Cell-free DNA secreted on culture medium was amplified using NICS Sample Preparation Kit (Yikon Genomics), based on the MALBAC technology. After whole genome amplification, the DNA was measured using a Qubit 2.0 fluorometer and subjected to next generation sequencing (NGS) using Illumina MiSeq® platform. The data were analyzed using the ChromGo® software (Yikon Genomics). RESULTS: The mean age of the patients was 38±4.08 years with an interval of 20-44 years. The euploid was diagnosed in 36.4% (80/220) of cases, aneuploidy in 31.3% (69/220), and mosaicism in 32.3% (71/220; with ≥60% aneuploidy) of blastocysts. Mosaic values ranged from 29.8% to 33.8% in different age groups. Individually, the most frequent chromosomal abnormality was XXY (Klinefelter Syndrome) occurring in 18 cases, followed by chromosome 21 (trisomy/monosomy) in 8 cases. The niPGT-A data showed a ≥60% incidence of aneuploid cells in all cases of chromosomal mosaicism (n=71). CONCLUSION: A high degree of mosaicism with aneuploidy cells was detected, and some hypotheses were suggested for this data (niPGT-A sensitivity in detecting the self-correction of chromosomal abnormalities phenomenon). However, it did not vary remarkably with age. On the other hand, euploidy levels had a negative correlation with age and aneuploidy levels had a positive relationship. This is the first report in the literature to relate chromosomal ploidy in blastocysts using niPGT-A and increasing patient age.