全血硫酸塩測定のための限外ろ過を伴うサンプル調製方法

チオ硫酸の定量分析は、硫化水素中毒の診断に役立ちます。液体クロマトグラフィータンデム質量分析（LC-MS/MS）により、以前の方法論よりも迅速で敏感な測定が可能になります。血液チオ硫酸濃度の単純な測定は血液マトリックスの影響を受けるため、溶媒として血液を使用して、キャリブレーション曲線生成の標準溶液を調製します。したがって、チオ硫酸塩のない大量の血液が必要です。この制限を克服し、純水で調製した標準溶液を使用してキャリブレーション曲線を生成するために、限界ステップを組み込むことにより、準備方法を開発しました。この改良された方法を使用して、冷蔵サンプル中のチオ硫酸塩の安定性を調査しました。冷凍の効果を比較するために、以下の2つの方法を使用して血液サンプルを調製しました。1つのサンプルを50 kDA除外超微細拡張膜で処理し、もう1つのサンプルは処理されませんでした。サンプルは4°Cで保存され、0、3、6、24、48、および96時間で測定しました。測定手順に限外ろ過ステップを組み込むことで、純水の標準を使用してキャリブレーション曲線をプロットすることにより、チオ硫酸塩の定量化が可能になりました。血液基準は必要ありませんでした。さらに、全血硫酸塩濃度の減少は、冷凍の2日間で10％以内でした。したがって、標準ソリューションを調製するための大量の血液の必要性は、テストサンプル調製における限外ろ過ステップによって解決されました。この方法は、チオ硫酸塩濃度を測定するのに役立ち、数日間サンプル冷蔵によって妨げられません。

Quantitative analysis of thiosulfate is useful for diagnosing hydrogen sulfide poisoning. Liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) enables more rapid and sensitive measurements than previous methodologies. As simple measurements of blood thiosulfate concentration are affected by the blood matrix, blood is used as the solvent to prepare the standard solution for calibration curve generation. Thus, a large amount of blood devoid of thiosulfate is required. We developed a preparation method by incorporating an ultrafiltration step to overcome this limitation and generate a calibration curve using a standard solution prepared with pure water. We used this improved method to investigate the stability of thiosulfate in refrigerated samples. To compare the effects of refrigeration, blood samples were prepared using the following two methods: one sample was treated with a 50-kDa exclusion ultrafiltration membrane and the other was not treated. The samples were stored at 4 °C, and then measured at 0, 3, 6, 24, 48, and 96 h. The incorporation of the ultrafiltration step in the measurement procedure enabled the quantification of thiosulfate, by plotting a calibration curve using a standard of pure water; it did not require a blood standard. Additionally, the reduction in whole blood thiosulfate concentration was within 10% during 2 days of refrigeration. Thus, the need for a large amount of blood to prepare the standard solution was resolved by the ultrafiltration step in test sample preparation. This method is useful to measure thiosulfate concentration and is not hindered by sample refrigeration for a few days.