未熟T細胞悪性腫瘍の診断マーカーとしてのCD3抗原の細胞質発現

細胞質CD3（CYCD3）の発現は、45の白血病、5つの胸腺細胞サンプル、5つの末梢血（PB）サンプル、および10細胞株で分析されました。表面膜CD3（SMCD3）を発現しなかったすべてのT細胞急性リンパ芽球性白血病（T-ALL）は、CYCD3を発現するように見えました。さらに、SMCD3+ T-ALLの大部分もCYCD3を発現しました。胸腺細胞の約95％がCYCD3を発現したのに対し、胸腺細胞の60％から75％がSMCD3を発現したという点で、胸腺細胞サンプルで類似した結果が得られました。正常な末梢血では、顕著なSMCD3の発現のみが見つかりました。これらのデータは、未熟T細胞がCYCD3のみを発現することを示しています。CYCD3とSMCD3の結合された発現は、中間分化段階の特徴であり、成熟したT細胞が顕著なSMCD3を発現することを示しています。すべて（前駆体）B細胞白血病、急性骨髄性白血病、およびテストされた非T細胞株はCYCD3を発現しませんでした。これらのデータに基づいて、CYCD3発現はT細胞系統に限定されており、未熟SMCD3-T細胞悪性腫瘍の診断マーカーとして使用できると結論付けます。したがって、どの固定液がCYCD3染色に最適であるかを評価し、CYCD3の検出に使用できる抗CD3モノクローナル抗体（MOAB）を使用できる免疫蛍光染色とウエスタンブロッティングによって決定されました。私たちの意見では、酸性エタノールは細胞中心性製剤の最良の固定剤でした。さらに、SPシリーズ（SP-6、SP-10、SP-64、およびSP-78）のような変性CD3鎖に対して発生したMOABSを使用することにより、CYCD3を簡単に検出できることを実証しました。さらに、オックスフォードCD3パネルの22の抗CD3 MOABSをネイティブSMCD3に対して上げたテストし、それらの4つ（UCHT1、VIT-3B、G19-41、SK7/LEU-4）のみが検出できるように見えました。CYCD3。ウエスタンブロット分析では、4つのMOABすべてがCD3-Epsilonチェーンのみを認識しました。

The expression of cytoplasmic CD3 (CyCD3) was analyzed in 45 leukemias, five thymus cell samples, five peripheral blood (PB) samples, and ten cell lines. All T cell acute lymphoblastic leukemias (T-ALL) that did not express surface membrane CD3 (SmCD3) appeared to express CyCD3. Furthermore, the majority of SmCD3+ T-ALL also expressed CyCD3. Analogous results were obtained with thymus cell samples in that about 95% of the thymocytes expressed CyCD3 whereas 60% to 75% of the thymocytes also expressed SmCD3. In normal peripheral blood only prominent SmCD3 expression was found. These data indicate that immature T cells express CyCD3 only, that the combined expression of CyCD3 and SmCD3 is characteristic for intermediate differentiation stages, and that mature T cells express prominent SmCD3. All (precursor) B cell leukemias, acute myeloid leukemias, and non-T cell lines tested did not express CyCD3. On the basis of these data, we conclude that CyCD3 expression is restricted to the T cell lineage and can be used as a diagnostic marker for immature SmCD3- T cell malignancies. Therefore, we evaluated which fixative is optimal for CyCD3 staining, and we determined by immunofluorescence staining and Western blotting which anti-CD3 monoclonal antibody (MoAb) can be used for the detection of CyCD3. In our opinion, acid ethanol was the best fixative for the cytocentrifuge preparations. Furthermore, we demonstrated that CyCD3 can be easily detected by use of MoAbs raised against denaturated CD3 chains such as those of the SP series (SP-6, SP-10, SP-64, and SP-78). In addition we tested 22 anti-CD3 MoAbs of the Oxford CD3 panel that were raised against native SmCD3, and it appeared that only four (UCHT1, VIT-3b, G19-41 and SK7/Leu-4) of them were able to detect CyCD3. In Western blot analysis all four MoAbs recognized the CD3-epsilon chain only.