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拡張ダイナミックレンジを備えた非常に敏感な量子ドット（QD）ベースのウエスタンブロットアッセイが開発されました。小型サイズのシングルQD（7.3 nm）とビッグサイズのQDナノベッド（QB）（82.9 nm）で構成されるバイモーダルサイズ分布QD（BQ）免疫プローブを、膜上の蛍光ウエスタンブロット免疫測定に使用しました。小サイズのQD免疫プローブは、より広いダイナミックレンジのアッセイに寄与しましたが、大きなサイズのQB免疫プローブはより高い検出感度を提供しました。このBQベースのウエスタンブロットアッセイは、広いダイナミックレンジ（7.8〜4000 ng IgG）を実現でき、UV光（365 nm）の励起と赤色光を備えた単純なジェルイメージャーを使用して、商業的に利用可能な超感受性化学発光法とほぼ同じくらい敏感です。フィルター（610 nm）。BQウエスタンブロットの蛍光シグナルは10分間安定していましたが、化学発光信号は1分後にフェードしました。さらに、このBQ免疫プローブは、複雑な細胞溶解物サンプルのハウスキーピングタンパク質および特定の標的タンパク質の検出に利用されました。ハウスキーピングタンパク質の検出の限界は0.25μgの細胞溶解物であり、シグナル強度は0.61〜80μgの広い範囲のタンパク質量を負荷することに比例しました。この新しいバイモーダルサイズ分布ナノ粒子の新しい戦略は、他の機能性ナノ粒子ベースの生物学的アッセイのために拡張して、感度を改善し、ダイナミックレンジを拡張できると考えています。グラフィカルな抽象。
拡張ダイナミックレンジを備えた非常に敏感な量子ドット（QD）ベースのウエスタンブロットアッセイが開発されました。小型サイズのシングルQD（7.3 nm）とビッグサイズのQDナノベッド（QB）（82.9 nm）で構成されるバイモーダルサイズ分布QD（BQ）免疫プローブを、膜上の蛍光ウエスタンブロット免疫測定に使用しました。小サイズのQD免疫プローブは、より広いダイナミックレンジのアッセイに寄与しましたが、大きなサイズのQB免疫プローブはより高い検出感度を提供しました。このBQベースのウエスタンブロットアッセイは、広いダイナミックレンジ（7.8〜4000 ng IgG）を実現でき、UV光（365 nm）の励起と赤色光を備えた単純なジェルイメージャーを使用して、商業的に利用可能な超感受性化学発光法とほぼ同じくらい敏感です。フィルター（610 nm）。BQウエスタンブロットの蛍光シグナルは10分間安定していましたが、化学発光信号は1分後にフェードしました。さらに、このBQ免疫プローブは、複雑な細胞溶解物サンプルのハウスキーピングタンパク質および特定の標的タンパク質の検出に利用されました。ハウスキーピングタンパク質の検出の限界は0.25μgの細胞溶解物であり、シグナル強度は0.61〜80μgの広い範囲のタンパク質量を負荷することに比例しました。この新しいバイモーダルサイズ分布ナノ粒子の新しい戦略は、他の機能性ナノ粒子ベースの生物学的アッセイのために拡張して、感度を改善し、ダイナミックレンジを拡張できると考えています。グラフィカルな抽象。
A highly sensitive quantum dot (QD)-based western blot assay with extended dynamic range was developed. Bimodal size distribution QD (BQ) immunoprobes composed of small size single QD (7.3 nm) and big size QD nanobead (QB) (82.9 nm) were employed for fluorescent western blot immunoassay on a membrane. Small size QD immunoprobes contributed to wider dynamic range of assay, while big size QB immunoprobes provided higher detection sensitivity. This BQ-based western blot assay can achieve a wide dynamic range (from 7.8 to 4000 ng IgG) and is nearly as sensitive as commercial available ultrasensitive chemiluminescent methods, just using a simple gel imager with UV light (365 nm) excitation and red light filter (610 nm). The fluorescent signals of BQ western blot were stable for 10 min, while chemiluminescent signals faded after 1 min. Moreover, this BQ immunoprobe was utilized for the detection of housekeeping protein and specific target proteins in complex cell lysate samples. The limit of detection of housekeeping protein is 0.25 μg of cell lysate, and the signal intensities were proportional to loading protein amount in a wide range from 0.61 to 80 μg. We believe that this new strategy of bimodal size distribution nanoparticles can also be expanded for other functional nanoparticle-based biological assays to improve the sensitivity and extend the dynamic range. Graphical abstract.
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