Saccharomyces cerevisiaeのスクアレンエポキシダーゼのin vitroアッセイ

基質として[14C]ピロリン酸ファルネシルピロリン酸を使用して、Saccharomyces cerevisiaeの無細胞抽出物におけるスクアレンエポキシダーゼ特異的活性を測定するための簡単なアッセイについて説明します。活性の補因子要件はFADおよびNADPHまたはNADHであり、NADPHは好ましい還元ピリジンヌクレオチドです。スクアレンエポキシダーゼ活性はミクロソーム画分に局在しており、最大の活性には上清可溶性因子は必要ありません。ミクロソーム画分は、ファルネシルピロリン酸をスクアレン、スクアレン2,3-エポキシド、ラノステロールに変換し、スクアレン2,3-エポキシド - ラノステロールシクラーゼもミクロソーム結合酵素であることを示しています。また、スクアレンエポキシダーゼ活性はエルゴステロールまたはラノステロールによって阻害されないが、酵素合成は酸素によって誘導されることも示しています。

We describe a simple assay for measuring squalene epoxidase specific activity in Saccharomyces cerevisiae cell-free extracts, by using [14C] farnesyl pyrophosphate as substrate. Cofactor requirements for activity are FAD and NADPH or NADH, NADPH being the preferred reduced pyridine nucleotide. Squalene epoxidase activity is localized in microsomal fraction and no supernatant soluble factor is required for maximum activity. Microsomal fraction converted farnesyl pyrophosphate into squalene, squalene 2,3-epoxide and lanosterol, showing that squalene 2,3-epoxide-lanosterol cyclase is also a microsome-bound enzyme. We show also that squalene epoxidase activity is not inhibited by ergosterol or lanosterol, but that enzyme synthesis is induced by oxygen.