Vibrio valnificusのエラスト溶解プロテアーゼの精製と特性評価

Vibrio valnificusの高度に精製された細胞外伸長プロテアーゼは、フェニルセファロースCL-4Bを使用した連続硫酸アンモニウムと疎水性相互作用クロマトグラフィーによって得られました。プロテアーゼのMRは、約50,500（SDS-PAGEで推定）、5.7のPI、および55〜60度の温度最適範囲を有していました。PH最適および不活性化研究の結果は、酵素が中性メタロプロテアーゼであることを示唆しています。。プロテアーゼには約429のアミノ酸残基があり、最初の20アミノ末端アミノ酸残基はALA-GLN-ALA-ASN-GLY-THLY-PRO-GLY-GLY-GLY-ASN-SER-LYS-THLY-GLY-arg-tyr-glu-phe-gly。精製されたプロテアーゼは、マウスに対して毒性があり（それぞれ約1.5 mg kg-1および4.5 mg kg-1、腹腔内LD50値と静脈内LD50値）、酵素の皮下注射は迅速かつ広範な皮膚症を引き出しました。

Large amounts of a highly purified, extracellular elastolytic protease of Vibrio vulnificus were obtained by sequential ammonium sulphate precipitation and hydrophobic interaction chromatography with phenyl-Sepharose CL-4B. The protease had an Mr of about 50,500 (estimated by SDS-PAGE), a pI of 5.7, and a temperature optimum range of 55 to 60 degrees C. The pH optimum and the results of inactivation studies suggested that the enzyme was a neutral metalloprotease. The protease had about 429 amino acid residues, and the first 20 amino-terminal amino acid residues were Ala-Gln-Ala-Asn-Gly-Thr-Gly-Pro-Gly-Gly-Asn-Ser-Lys-Thr-Gly-Arg-Tyr-Glu- Phe-Gly . The purified protease was toxic for mice (about 1.5 mg kg-1 and 4.5 mg kg-1, intraperitoneal and intravenous LD50 values, respectively), and subcutaneous injection of the enzyme elicited rapid and extensive dermonecrosis.