ペルオキシダーゼ活性を高め、合理的な修飾を伴うフィシンのプロテアーゼ活性を低下させ、グルコースのワンステップの比色検出への応用

フィシンには、二重酵素活性、すなわちプロテアーゼおよびペルオキシダーゼ様活性があります。いくつかの点で、その適用はフィシンのプロテアーゼ活性によって制限されています。ここでは、トリス（2-カルボキシエチル）塩酸ホスフィン（TCEP）を使用してフィシンのジスルフィド結合の3つのペアを破壊し、N-エチルマレイミド（NEM）で遊離チオール基をブロックしてフィシン-TNを合成しました。結果は、フィシン-TNがペルオキシダーゼ様活性を増加させ、プロテアーゼ活性を低下させたことを示しました。この現象によれば、グルコースのワンステップ検出のために高感度と選択性を備えた比色法を利用しました。FICINと比較すると、FICIN-TNは検出範囲（0.1〜300μm）および低い検出限界（88 nm）の範囲であり、他の2段階の方法よりも単純で時間がかかります。さらに、ヒト血清中のグルコース検出のためのフィシン-TNの実際の電化製品は、満足した結果をもって示されており、さまざまな分野での有望な利用が示唆されています。

Ficin has dual enzyme activity, i.e., protease and peroxidase-like activity. In some respects, its application is limited by the protease activity of ficin. Herein, we used tris (2-carboxyethyl) phosphine hydrochloride (TCEP) to break the three pairs of disulfide bonds of ficin, and then blocked the free thiol groups with N-ethylmaleimide (NEM) to synthesize ficin-TN. The results showed that ficin-TN had increased peroxidase-like activity and reduced protease activity. According to this phenomenon, we have exploited a colorimetric method with high sensitivity and selectivity for the one-step detection of glucose. Comparing with ficin, ficin-TN has wider detection range (0.1-300 μM) and lower detection limit (88 nM), and our method is simpler and more timesaving than other two-step methods. Furthermore, the actual appliances of ficin-TN for glucose detection in human serum have been illustrated with satisfied result, suggesting that its promising utilization in various fields.