抗体アレイとPHOS-TAGビオチンを使用したタンパク質リン酸化状態の決定

ここでは、抗体アレイを使用したタンパク質マルチプレックスのリン酸化状態と、ドデカ（エチレングリコール）スペーサー（PHOS-TAGビオチン）を使用したビオチン化PHOSタグを使用する標準プロトコルについて説明します。この手順は、化学発光システムの強化と組み合わせて使用​​される抗体マイクロアレイ技術に基づいており、細胞ライセート中の複数のリンタンパク質の同時かつ高感度の検出を可能にします。この手順を使用することにより、細胞内シグナル伝達に関与する標的タンパク質のリン酸化状態全体の定量的検出を実証しました。

We describe here a standard protocol for determining the phosphorylation status of protein multiplexes using antibody arrays and a biotinylated Phos-tag with a dodeca(ethylene glycol) spacer (Phos-tag Biotin). The procedure is based on an antibody microarray technique used in conjunction with an enhanced chemiluminescence system, and it permits the simultaneous and highly sensitive detection of multiple phosphoproteins in a cell lysate. By using this procedure, we have demonstrated the quantitative detection of the entire phosphorylation status of a target protein involved in intracellular signaling.