[胚培地浸透圧に対するインキュベーターのタイプ（非乳化と加湿）の影響]

はじめに：胚の発達中の環境ストレスを減らす胚培養条件の安定性を改善するために、小さな個々のチャンバーを持つベンチトップインキュベーターが開発されました。これらの新しい乾燥インキュベーターは、細菌の増殖を防ぎ、タイムラプスシステムの使用を可能にするために、空気加湿システムなしで設計されました。ただし、培地の蒸発の上昇は、これらの条件で発生する可能性があります。この研究の主な目的は、使用済みのインキュベータータイプが胚培地液浸透圧に及ぼす影響を分析することです。 材料と方法：50μlの培地のマイクロドロップを直径60mmの培養皿に配置し、層流エアフローを備えたIVFワークステーションで7または8mlのミネラル油ですぐに覆われました。2つのシリーズの培養料理は、加湿インキュベーターまたは乾燥したベンチトップインキュベーターのいずれかにランダムに配置されています。各培養皿のマイクロドロップは、それぞれD0、D1、D2、D3、およびD5でサンプリングされ、凍結鏡浸透圧を使用して浸透圧を3回測定しました。各インキュベーターの浸透圧の平均値は、それぞれ適切な統計テストを使用してD0、D1、D2、D3、およびD5で比較されており、P <0.05の場合は統計的に有意であると考えられています。 結果：ドライベンチトップインキュベーターに配置されたマイクロドロップの浸透圧は、培養皿のミネラル油のレベルに関係なく、培養の3日目の後に大幅に異なりました。実際、それぞれ7または8mlのミネラル油で覆われたペトリ皿を使用して、乾燥インキュベーターのサンプルの浸透圧値は、D3およびD5（D3/7ML：273±2.1対268±1.0）の加湿剤からのサンプルの浸透圧よりも有意に高かったmosm/kg;p = 0.04）およびd5（d5/7ml：283±1.5対270±3.6mosm/kg; p = 0.004; d5/8ml：287±5.6対268±2.3mosm/kg; p = 0.005）。さらに、ペア付きサンプルの分析により、7mLのオイル（283±1.5mosm/kg; p = 0.003）およびD3（273±2.1mosm/kg; p = 0.016）およびD3（283±1.5mosm/kg; P = 0.016）を使用して、D5の乾燥ベンチトップインキュベーターの浸透圧が示されました。8mlのオイルを使用したD5（287±5.6mosm/kg; P = 0.009）は、それよりも有意に高かったD0（265±1.9mosm/kg）で測定。 結論：標準的な条件で周囲の湿度測定を伴う乾燥ベンチトップインキュベーターで、胚培地媒体の浸透圧の大幅な増加が観察されました。1mlのオイルを追加するだけでは、媒体の蒸発を減らすのに十分ではありませんでした。生理学的レベルに維持されていますが、浸透圧の影響はin vitro胚の発達に与える影響をさらに決定する必要があります。

INTRODUCTION: Benchtop incubators with small individual chambers have been developed in order to improve the stability of embryo culture conditions reducing the environmental stress during the embryo development. These new dry incubators were designed without any air humidification system in order to prevent bacterial proliferation and to enable the use of time-lapse system. However, an elevated evaporation of the culture media could occur in these conditions. The main objective of the study is to analyse the impact of the used incubator type on the embryo culture media osmolality. MATERIALS AND METHODS: Microdrops of 50μL of culture media were placed in 60mm diameter culture dishes, and quickly covered with either 7 or 8mL of mineral oil in an IVF workstation with laminar airflow. Two series of culture dishes have been randomly placed either in a humidified incubator or in a dry benchtop incubator. The microdrops of each culture dishes were sampled at D0, D1, D2, D3, and D5 respectively to measure the osmolality in triplicate using a cryoscopic osmometer. The mean values of osmolality in each incubator have been compared respectively on D0, D1, D2, D3 and D5 with appropriate statistical tests, and considered statistically significant when P<0.05. RESULTS: The osmolality of the microdrops placed in the dry benchtop incubator differed significantly after the third day of culture, regardless of the level of mineral oil in the culture dishes. Indeed, using Petri dishes covered respectively with 7 or 8mL of mineral oil, osmolality values of samples from the dry incubator were significantly higher than those from the humidified one, at D3 and D5 (D3/7mL: 273±2.1 vs. 268±1.0mOsm/kg; P=0.02; D3/8mL: 282±8.0 vs. 270±0.7mOsm/kg; P=0.04) and D5 (D5/7mL: 283±1.5 vs. 270±3.6mOsm/kg; P=0.004; D5/8mL: 287±5.6 vs. 268±2.3mOsm/kg; P=0.005). Furthermore, the analysis on paired samples showed that the osmolality in the dry benchtop incubator at D5 using 7mL of oil (283±1.5mOsm/kg; P=0.003) and at D3 (273±2.1mOsm/kg; P=0.016) and D5 (287±5.6mOsm/kg; P=0.009) using 8mL of oil was significantly higher than that measured at D0 (265±1.9mOsm/kg). CONCLUSION: A significant increase of the embryo culture media osmolality was observed in the dry benchtop incubator with ambient hygrometry in our standard conditions. Adding 1mL of oil was not sufficient to reduce the evaporation of the media. Although maintained at a physiological level, the impact of the osmolality changes on the in vitro embryo development has to be further determined.