マクロファージのFURA-2分泌と隔離有機アニオン輸送のブロッカーは、これらのプロセスが有機陰イオンの膜輸送システムを介して発生することを明らかにしています

Acetoxymethyl EsterとしてJ774.2マクロファージに搭載されたFURA-2は、37度Cでの荷重の開始後90分以内に細胞内液胞に隔離されます。色素は細胞から効率的に分泌されます。Fura-2の隔離と分泌は、この細胞株におけるサイトゾルを含まないCa2+濃度の測定の精度を低下させます。Fura-2は、原形質膜の可逆的透過性により、染料が細胞質に補助塩として細胞質に搭載されると、J774.2によって隔離および分泌されます。Fura-2が細胞質にロードされるメカニズムに関係なく、隔離と分泌の両方が、有機陰イオン輸送のブロッカーである2.5 mm Probenecidによって防止されます。Probenecidは、静止または刺激されたサイトゾルを含まないCa2+レベル、またはFCRを介した食作用に影響を与えません。これらの発見は、マクロファージがFURA-2の陰イオン型の輸送メカニズムを表現することを示唆しています。この輸送システムは、この細胞型の細胞質からのFURA-2のクリアランスを担当しています。さらに、Fura-2の分泌と細胞内隔離をブロックするためにプロベネシドを使用すると、このCa2+指標のマクロファージおよびおそらく他の細胞型への適用に生じる問題を克服する可能性があることを提案します。

Fura-2, loaded into J774.2 macrophages as the acetoxymethyl ester, is sequestered into intracellular vacuoles within 90 min after the beginning of the loading at 37 degrees C. The dye is also efficiently secreted from the cells. Sequestration and secretion of fura-2 reduce the accuracy of measurements of cytosolic free Ca2+ concentration in this cell line. Fura-2 is also sequestered and secreted by J774.2 when the dye is loaded into the cytoplasm as the pentapotassium salt by reversible permeabilization of the plasma membrane. Regardless of the mechanism by which fura-2 is loaded into the cytoplasm, both sequestration and secretion are prevented by 2.5 mM probenecid, a blocker of organic anion transport. Probenecid has no effect on resting or stimulated cytosolic free Ca2+ levels or on FcR-mediated phagocytosis. These findings suggest that macrophages express a transport mechanism for the anionic form of fura-2. This transport system is responsible for the clearance of fura-2 from the cytoplasm of this cell type. Furthermore we suggest that use of probenecid to block secretion and intracellular sequestration of fura-2 may overcome problems arising in the application of this Ca2+ indicator to macrophages and perhaps to other cell types.