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Toxicology research2020Dec01Vol.9issue(6)

AML12マウス肝細胞におけるメチルキサンチン薬物テオフィリン誘発性Ca2+シグナル伝達と細胞毒性のメカニズム

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文献タイプ:
  • Journal Article
概要
Abstract

テオフィリンは、呼吸器疾患の治療に使用されるメチルキサンチン薬です。しかし、Ca2+シグナル伝達に対するテオフィリンの影響は肝臓細胞では調査されていません。この研究では、テオフィリンがCa2+恒常性に影響を与え、AML12マウス肝細胞におけるその関連する細胞毒性に影響したかどうかを調べました。細胞生存率は、細胞生存率試薬(WST-1)によって測定されました。サイトゾルCa2+濃度([Ca2+] I)は、Ca2+感受性蛍光色素Fura-2によって測定されました。テオフィリン(25-125μM)は[Ca2+] Iが上昇し、AML12細胞で細胞毒性を引き起こしました。この細胞毒性応答は、細胞質Ca2+のbapta/amのキレート化により逆転しました。Ca2+ - フリー培地では、小胞体Ca2+ポンプ阻害剤タプシガルギンによる治療は、テオフィリン誘発性[Ca2+] Iが廃止しました。逆に、テオフィリンによる治療は、タプシガルギン誘導[Ca2+] I Risesも廃止しました。しかし、PLCの阻害は、テオフィリン誘発[Ca2+] Iが上昇することに失敗しました。Ca2+を含む培地では、Store操作Ca2+チャネルのモジュレーターは[Ca2+] Iの30%を阻害しましたが、PKCモジュレーターは効果がありませんでした。さらに、テオフィリン誘発性Ca2+流入は、Mn2+誘発性Fura-2蛍光のクエンチによって確認されました。AML12細胞では、テオフィリンがCa2+関連の細胞毒性を引き起こし、小胞体およびPKCに依存しないCa2+放出を介してCa2+侵入を誘導し、PKCに感受性のある貯蔵式Ca2+チャネルを引き起こしました。その保護効果を伴うBAPTA-AMは、テオフィリン誘発性細胞毒性の予防のための潜在的な化合物である可能性があります。

テオフィリンは、呼吸器疾患の治療に使用されるメチルキサンチン薬です。しかし、Ca2+シグナル伝達に対するテオフィリンの影響は肝臓細胞では調査されていません。この研究では、テオフィリンがCa2+恒常性に影響を与え、AML12マウス肝細胞におけるその関連する細胞毒性に影響したかどうかを調べました。細胞生存率は、細胞生存率試薬(WST-1)によって測定されました。サイトゾルCa2+濃度([Ca2+] I)は、Ca2+感受性蛍光色素Fura-2によって測定されました。テオフィリン(25-125μM)は[Ca2+] Iが上昇し、AML12細胞で細胞毒性を引き起こしました。この細胞毒性応答は、細胞質Ca2+のbapta/amのキレート化により逆転しました。Ca2+ - フリー培地では、小胞体Ca2+ポンプ阻害剤タプシガルギンによる治療は、テオフィリン誘発性[Ca2+] Iが廃止しました。逆に、テオフィリンによる治療は、タプシガルギン誘導[Ca2+] I Risesも廃止しました。しかし、PLCの阻害は、テオフィリン誘発[Ca2+] Iが上昇することに失敗しました。Ca2+を含む培地では、Store操作Ca2+チャネルのモジュレーターは[Ca2+] Iの30%を阻害しましたが、PKCモジュレーターは効果がありませんでした。さらに、テオフィリン誘発性Ca2+流入は、Mn2+誘発性Fura-2蛍光のクエンチによって確認されました。AML12細胞では、テオフィリンがCa2+関連の細胞毒性を引き起こし、小胞体およびPKCに依存しないCa2+放出を介してCa2+侵入を誘導し、PKCに感受性のある貯蔵式Ca2+チャネルを引き起こしました。その保護効果を伴うBAPTA-AMは、テオフィリン誘発性細胞毒性の予防のための潜在的な化合物である可能性があります。

Theophylline is a methylxanthine drug used in therapy for respiratory diseases. However, the impact of theophylline on Ca2+ signaling has not been explored in liver cells. This study examined whether theophylline affected Ca2+ homeostasis and its related cytotoxicity in AML12 mouse hepatocytes. Cell viability was measured by the cell viability reagent (WST-1). Cytosolic Ca2+ concentration ([Ca2+]i) was measured by the Ca2+-sensitive fluorescent dye fura-2. Theophylline (25-125 μM) induced [Ca2+]i rises and cause cytotoxicity in AML12 cells. This cytotoxic response was reversed by chelation of cytosolic Ca2+ with BAPTA/AM. In Ca2+-free medium, treatment with the endoplasmic reticulum Ca2+ pump inhibitor thapsigargin abolished theophylline-induced [Ca2+]i rises. Conversely, treatment with theophylline also abolished thapsigargin-induced [Ca2+]i rises. However, inhibition of PLC failed to alter theophylline-evoked [Ca2+]i rises. In Ca2+-containing medium, modulators of store-operated Ca2+ channels inhibited 30% of the [Ca2+]i rises, whereas the PKC modulators had no effect. Furthermore, theophylline-induced Ca2+ influx was confirmed by Mn2+-induced quench of fura-2 fluorescence. Together, in AML12 cells, theophylline caused Ca2+-associated cytotoxicity and induced Ca2+ entry through PLC-independent Ca2+ release from the endoplasmic reticulum and PKC-insensitive store-operated Ca2+ channels. BAPTA-AM with its protective effects may be a potential compound for prevention of theophylline-induced cytotoxicity.

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