サイトカイン放出アッセイプラットフォームの資格と検証のための最初の参照抗体パネルの開発 - 国際的な共同研究のレポート

モノクローナル抗体（mAb）などの免疫調節治療薬は、望ましくない免疫反応の固有のリスクをもたらします。そのようなリスクの1つは、免疫細胞からの炎症誘発性サイトカインの分泌を特徴とする急速な全身性炎症反応であるサイトカイン放出症候群（CRS）です。患者の安全性が、人間に最初の投与前にCRSの潜在的なリスクを正しく特定することが重要です。この目的のために、さまざまなin vitroサイトカイン放出アッセイ（CRA）が、新規治療MABの前臨床安全評価の一部として日常的に使用されています。CRAパフォーマンスの開発と比較の課題の1つは、アッセイ資格で使用するための標準的な陽性および陰性対照MABの可用性の欠如です。この問題に対処するために、国立生物基準制御研究所（NIBSC）は、クリニックでCRSを誘導することが知られている凍結乾燥mAbの参照パネルを開発しました：ヒト抗CD52、マウス抗CD3、およびヒトスーパーアゴニズム（SA）抗CD28 mAbCampath-1H®（Alemtuzumab、IgG1）、Orthoclone OKT-3®（Muromonab、IgG2A）およびTGN1412（Tgherizumab、IgG4）のそれぞれの公開されたシーケンスに従って製造されています。それぞれヒトIgG4）。IFN-γ、IL-2、TNF-α、IL-6のin vitroの放出を刺激するこれらのコントロールMABの相対能力は、HESI免疫安全技術委員会のサイトカインリリースを介した国際的な共同研究で11の研究所で評価されました。アッセイワーキンググループ。参加者は、各機関で確立されたさまざまなCRAプラットフォームでNIBSC MABをテストしました。この論文では、各mAbの単一濃度によって異なるCRAプラットフォームの免疫細胞の刺激に対応するすべての血漿/上清の集中化されたサイトカインの定量化の結果を示します。それぞれの陽性対照MABは、テストされたCRAプラットフォームのほとんどで有意なサイトカイン放出を誘導しました。生成されたサイトカインのレベルには高いlab岩間変動がありましたが、それぞれの臨床治療MABのために以前に公開されたサイトカイン放出パターンを複製した研究所で同様の反応パターンが観察されました。したがって、正と負のmAbは、CRAの資格と検証、異なるCRAプラットフォームの比較（たとえば、固体VS水相）、およびCRAパフォーマンスのラボン内およびラボン間比較の参照パネルとして適しています。したがって、この陽性および陰性対照MABのこのパネルを使用すると、CRAプラットフォームの堅牢性に対する信頼が高まり、新規免疫調節治療候補の潜在的なCRSリスクを特定します。

Immunomodulatory therapeutics such as monoclonal antibodies (mAb) carry an inherent risk of undesired immune reactions. One such risk is cytokine release syndrome (CRS), a rapid systemic inflammatory response characterized by the secretion of pro-inflammatory cytokines from immune cells. It is crucial for patient safety to correctly identify potential risk of CRS prior to first-in-human dose administration. For this purpose, a variety of in vitro cytokine release assays (CRA) are routinely used as part of the preclinical safety assessment of novel therapeutic mAbs. One of the challenges for the development and comparison of CRA performance is the lack of availability of standard positive and negative control mAbs for use in assay qualification. To address this issue, the National Institute for Biological Standards and Control (NIBSC) developed a reference panel of lyophilised mAbs known to induce CRS in the clinic: human anti-CD52, mouse anti-CD3 and human superagonistic (SA) anti-CD28 mAb manufactured according to the respective published sequences of Campath-1H® (alemtuzumab, IgG1) , Orthoclone OKT-3® (muromonab, IgG2a) and TGN1412 (theralizumab, IgG4), as well as three isotype matched negative controls (human IgG1, mouse IgG2a and human IgG4, respectively). The relative capacity of these control mAbs to stimulate the release of IFN-γ, IL-2, TNF-α and IL-6 in vitro was evaluated in eleven laboratories in an international collaborative study mediated through the HESI Immuno-safety Technical Committee Cytokine Release Assay Working Group. Participants tested the NIBSC mAbs in a variety of CRA platforms established at each institution. This paper presents the results from the centralised cytokine quantification on all the plasma/supernatants corresponding to the stimulation of immune cells in the different CRA platforms by a single concentration of each mAb. Each positive control mAb induced significant cytokine release in most of the tested CRA platforms. There was a high inter-laboratory variability in the levels of cytokines produced, but similar patterns of response were observed across laboratories that replicated the cytokine release patterns previously published for the respective clinical therapeutic mAbs. Therefore, the positive and negative mAbs are suitable as a reference panel for the qualification and validation of CRAs, comparison of different CRA platforms (e.g. solid vs aqueous phase), and intra- and inter-laboratory comparison of CRA performance. Thus, the use of this panel of positive and negative control mAbs will increase the confidence in the robustness of a CRA platform to identify a potential CRS risk for novel immunomodulatory therapeutic candidates.