H2O2によって誘導されるH9C2心筋細胞の酸化ストレスおよびアポトーシスに対するDioscorea cirrhosaからの水画分の有効性

目的：H2O2によって誘導された心筋細胞の酸化的損傷とアポトーシスに対するcirrhosa（WF）Dioscorea（WF）からの水画分の有効性を調査し、そのメカニズムを研究します。 方法：細胞生存率は、MSTアッセイキットによって測定されました。マロンジアルデヒド（MDA）の含有量、乳酸デヒドロゲナーゼ（LDH）の放出、およびカタラーゼ（CAT）およびスーパーオキシドジスムターゼ（SOD）の活性は、生化学キットによって検出されました。反応性酸素種（ROS）の含有量は、非蛍光プローブ2 '、7'-ジクロロフルオーシンジアセテート（DCFH-DA）によって評価されました。JC-1を使用して、ミトコンドリア膜電位（MTΔψ）を分析し、フローサイトメトリーによるH9C2のアポトーシスを評価するためにアネキシン-V-FITC/PI染色を適用しました。さらに、B細胞リンパ腫-2（Bcl-2）、Bcl-2関連X（BAX）、カスパーゼ-3、カスパーゼ-9、切断カスパーゼ-3および切断されたカスパーゼ-9タンパク質の発現は、ウエスタンブロット分析。 結果：WFは、H2O2に曝露したH9C2細胞の細胞生存率を増加させ、LDH漏れを減少させました。WF治療により、ROSおよびMDAレベルが低下し、SODとCAT活性が強化され、MTΔψが改善され、アポトーシスが阻害されました。ウエスタンブロット分析により、Bcl-2/Baxの比率が増加し、発現がCleaved-caspase-3、Caspase-3、Cleaved-caspase-9およびCaspase-9がWFで処理したグループで減少したことが示されました。 結論：WFは、ROSを除去し、抗酸化能力を改善し、ミトコンドリアを保護し、アポトーシスに関連するタンパク質発現を調節することにより、H2O2誘導酸化ストレスおよびアポトーシス上のH9C2心筋細胞を保護します。

OBJECTIVE: To investigate the efficacy of water fraction from Dioscorea cirrhosa (WF) on oxidative damage and apoptosis of cardiomyocytes induced by H2O2, and to study its mechanism. METHODS: Cell viability was measured by the MST assay kit. The content of malondialdehyde (MDA), release of lactate dehydrogenase (LDH) and activity of catalase (CAT) and superoxide dismutase (SOD) were detected by biochemical kit. The content of reactive oxygen species (ROS) was assessed by nonfluorescent probe 2' ,7'-dichlorofluorescin diacetate (DCFH-DA). JC-1 was used to analyze the mitochondrial membrane potential (mtΔΨ) and Annexin-V-FITC/PI staining was applied to assess apoptosis of H9c2 by flow cytometry. Moreover, the expression of B-cell lymphoma-2 (Bcl-2), Bcl-2-associated X (Bax), caspase-3, caspase-9, cleaved-caspase-3 and cleaved-caspase -9 proteins was determined by western blot analysis. RESULTS: WF increased cell viability and decreased LDH leakage in H9c2 cells exposed to H2O2. WF treatment decreased ROS and MDA level, enhanced SOD and CAT activities, improved mtΔΨ and inhibited apoptosis. Western blot analysis demonstrated that the ratio of Bcl-2/Bax was increased and the expression cleaved-caspase-3, caspase-3, cleaved-caspase-9 and caspase-9 were decreased in group treated with WF. CONCLUSION: WF protects H9c2 myocardial cells on H2O2-induced oxidative stress and apoptosis by scavenging ROS, improving antioxidant capacity, protecting mitochondrial and regulating the proteins expression related to apoptosis.