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背景：マスト細胞（MCS）は、自然および適応免疫応答において極めて重要な役割を果たします。ただし、MCはさまざまな病理学的状態にも関与しています。ヒトMC機能を支配するメカニズムに関する研究は、それらの限られた困難な回復によって妨げられます。したがって、いくつかの研究グループは、前駆細胞から人間のMCを培養するためのプロトコルを開発しました。これらのプロトコルは、培養期間と使用された成熟サイトカインに関して異なります。さまざまなプロトコルによって得られたMCが表現型と機能性がどのように異なるかは現在不明です。 目的：末梢血の前駆細胞からのヒトMCの生成のための異なるプロトコルを比較する。 方法：13のペアのヒトMC培養を調査しました。MCは、IL-6を添加した場合または伴わずに、4週間または8週間、CD34+前駆細胞を形成しました。表現型は、CD117、CD203C、FCεRI、MRGPRX2、CD300A、CD32の染色を含んでいた。機能的研究には、SIGE/FCεRI複合体のアレルゲン特異的架橋後のCD63およびCD203Cのアップレギュレーションの測定またはMRGPRX2の物質Pおよび異なる薬物とのライゲーションが含まれていました。 結果：IL-6の存在下で4週間の細胞培養により、一貫してMCSの数が最も多くなりました。IL-6で8週間培養されたMCSは、FCεRIとCD32の正しい分析を著しく妨げるより多くの自己蛍光を示しました。FCεRIとCD32の密度は、異なる培養条件間で同等でした。MRGPRX2の発現は、8週間の培養で有意に高かった。CD300Aの密度は、IL-6の培養で増加しました。8週間培養された細胞は、MRGPRX2の活性化に対してより反応しました。対照的に、IL-6の4週間の培養は、アレルゲン特異的活性化が有意に高いことを示しました。 結論：IL-6の4週間の培養では、血液前駆細胞からかなりの数のヒトマスト細胞を生成するのに十分であり、それにより、MrGPRX2を介したアレルゲン特異的Sige/FcεRI架橋と非特異的活性化の同時調査を可能にします。
背景：マスト細胞（MCS）は、自然および適応免疫応答において極めて重要な役割を果たします。ただし、MCはさまざまな病理学的状態にも関与しています。ヒトMC機能を支配するメカニズムに関する研究は、それらの限られた困難な回復によって妨げられます。したがって、いくつかの研究グループは、前駆細胞から人間のMCを培養するためのプロトコルを開発しました。これらのプロトコルは、培養期間と使用された成熟サイトカインに関して異なります。さまざまなプロトコルによって得られたMCが表現型と機能性がどのように異なるかは現在不明です。 目的：末梢血の前駆細胞からのヒトMCの生成のための異なるプロトコルを比較する。 方法：13のペアのヒトMC培養を調査しました。MCは、IL-6を添加した場合または伴わずに、4週間または8週間、CD34+前駆細胞を形成しました。表現型は、CD117、CD203C、FCεRI、MRGPRX2、CD300A、CD32の染色を含んでいた。機能的研究には、SIGE/FCεRI複合体のアレルゲン特異的架橋後のCD63およびCD203Cのアップレギュレーションの測定またはMRGPRX2の物質Pおよび異なる薬物とのライゲーションが含まれていました。 結果：IL-6の存在下で4週間の細胞培養により、一貫してMCSの数が最も多くなりました。IL-6で8週間培養されたMCSは、FCεRIとCD32の正しい分析を著しく妨げるより多くの自己蛍光を示しました。FCεRIとCD32の密度は、異なる培養条件間で同等でした。MRGPRX2の発現は、8週間の培養で有意に高かった。CD300Aの密度は、IL-6の培養で増加しました。8週間培養された細胞は、MRGPRX2の活性化に対してより反応しました。対照的に、IL-6の4週間の培養は、アレルゲン特異的活性化が有意に高いことを示しました。 結論：IL-6の4週間の培養では、血液前駆細胞からかなりの数のヒトマスト細胞を生成するのに十分であり、それにより、MrGPRX2を介したアレルゲン特異的Sige/FcεRI架橋と非特異的活性化の同時調査を可能にします。
BACKGROUND: Mast cells (MCs) play a pivotal role in innate and adaptive immune responses. However, MCs are also involved in different pathologic conditions. Studies on the mechanisms that govern human MC functions are impeded by their limited and difficult recovery. Therefore, several research groups have developed protocols to culture human MCs from progenitor cells. These protocols vary with respect to culture duration and used maturation cytokines. How MCs obtained by different protocols differ in phenotype and functionality is currently unknown. OBJECTIVE: To compare different protocols for the generation of human MCs from peripheral blood progenitors. METHODS: Thirteen paired human MC cultures were investigated. MCs were cultured form CD34+ progenitors cells for 4 or 8 weeks and with or without the addition of IL-6. Phenotyping comprised staining for CD117, CD203c, FcεRI, MRGPRX2, CD300a and CD32. Functional studies included measurements of the up-regulation of CD63 and CD203c after allergen-specific cross-linking of sIgE/FcεRI complexes or ligation of MRGPRX2 with substance P and different drugs. RESULTS: Cell cultures for 4 weeks in the presence of IL-6 consistently yielded the highest numbers of MCs. MCs cultured for 8 weeks with IL-6 showed more autofluorescence significantly impeding correct analyses of FcεRI and CD32. The density of FcεRI and CD32 was comparable between the different culture conditions. MRGPRX2 expression was significantly higher in the 8 week cultures. The density of CD300a was increased in the cultures with IL-6. Cells cultured for 8 weeks were more responsive to MRGPRX2 activation. In contrast, the 4-weeks cultures with IL-6 showed significantly higher allergen-specific activation. CONCLUSION: Four weeks of culture with IL-6 are sufficient to generate sizeable numbers of human mast cells from blood progenitors, thereby enabling simultaneous exploration of allergen-specific sIgE/FcεRI cross-linking and non-specific activation via MRGPRX2.
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