Enterococcus faecalisのバイオフィルム形成に対するCLPPプロテアーゼの効果

目的：耐性術後歯周炎および院内感染症の原因となる主要な病原体の1つである腸骨（faecalis）は、バイオフィルムで著しく高い病原性を示します。研究では、カゼン分解プロテアーゼP（CLPP）がバイオフィルム形成に関与していることが示されています。しかし、これまで、E。faecalisの生存およびバイオフィルム形成の強化におけるCLPPの役割を調査した研究はほとんどありません。したがって、E。faecalisバイオフィルムの形成におけるCLPPの役割を調査しました。 方法論：私たちの研究では、相同組換えを使用して、E。faecalisATCC 29212のCLPP削除およびCLPP補体株を構築しました。クリスタルバイオレット染色（CV）および共焦点スキャンレーザー顕微鏡（CLSM）を使用して、バイオフィルム質量形成と走査型電子顕微鏡（SEM）を使用して、バイオフィルム微細構造を観察しました。データは、学生のt検定または一元配置分散分析（ANOVA）を介して統計的に分析されました。 結果：結果は、CLPP欠失株の変化した成長パターンと枯渇した多糖マトリックスを示し、標準株と比較してバイオフィルム形成能力の低下をもたらしました。さらに、CLPPは、E。faecalisのバイオフィルム形成を増加させることが観察されました。 結論：私たちの研究は、CLPPがE. faecalisのバイオフィルム形成を増加させることができることを示しており、E。faecalisに対する潜在的な標的としてのCLPPの重要性を強調しています。

OBJECTIVES: Enterococcus faecalis (E. faecalis), one of the main pathogens responsible for refractory periapical periodontitis and nosocomial infections, exhibits markedly higher pathogenicity in biofilms. Studies have shown that caseinolytic protease P (ClpP) is involved in biofilm formation. However, to date, few studies have investigated the role of ClpP in the survival of E. faecalis, and in enhancing biofilm formation. Therefore, we investigated the role of ClpP in the formation of E. faecalis biofilms. METHODOLOGY: In our study, we used homologous recombination to construct clpP deleted and clpP complement strains of E. faecalis ATCC 29212. A viable colony counting method was used to analyze the growth patterns of E. faecalis. Crystal violet staining (CV) and confocal scanning laser microscopy (CLSM) were used to characterize biofilm mass formation and scanning electron microscopy (SEM) was used to observe the biofilm microstructure. Data was statistically analyzed via Student's t-test or one-way analysis of variance (ANOVA). RESULTS: The results exhibited altered growth patterns for the clpP deletion strains and depleted polysaccharide matrix, resulting in reduced biofilm formation capacity compared to the standard strains. Moreover, ClpP was observed to increase biofilm formation in E. faecalis. CONCLUSION: Our study shows that ClpP can increase biofilm formation in E. faecalis and emphasizes the importance of ClpP as a potential target against E. faecalis.