変成ゼブラフィッシュに適した麻酔プロトコル

ゼブラフィッシュは、発達を調査する手段として頻繁に使用されます。これらの研究では、少年（つまり変態）段階でゼブラフィッシュの繰り返し麻酔がますます必要になります。この期間中の麻酔の効果は、あまり研究されていないままです。この研究の目的は、少年段階で頻繁に繰り返される麻酔に使用できる信頼できる方法を開発することでした。当初、回復した30分の麻酔のために、最も一般的に使用される魚麻酔薬であるMS-222の異なる濃度を評価しました。適切なMS-222用量が最小（7mm）および最大（20mm）の魚について識別できることを示しました。しかし、特定の変成窓内の幼虫魚（8〜16 mmのサイズ）はMS-222に対して脆弱であり、MS-222の標準濃度はこれらの条件下で信頼できる麻酔を提供しないことがわかりました。したがって、これらの段階のプロトコルを特定することに努力しました。P1、P2は0.01％MS-222、P3、P4：0.085％2-フェノキシエタノールおよびP5、P6：0.00025％/0.0050％プロポフォール/リドカインに対応する6つの異なる公開麻酔プロトコルP1-P6をテストしました。プロトコルでは、p1、p3、p5魚は浸漬によって維持され、p2、p4、p6：魚は麻酔薬が染まったコットンパッドに維持されました。10分間、10分間の信頼できる麻酔を評価し、完全に回復しました。私たちのデータにより、これらのプロトコルのうち2つを、少年魚の回復を伴う短期麻酔に適さないものとして排除することができました。これらの研究を拡張して、残りの4つのプロトコルの下で20日間4日間隔で繰り返し麻酔を探索し、P1とP4が繰り返し麻酔に適しており、P4がイメージングに最も適していることを示しました。麻酔の頻度が2日ごとに増加した場合、P4が適切なままであることを確認しました。このプロトコルは、脆弱な変態ウィンドウで幼虫のゼブラフィッシュの回復を伴う繰り返し麻酔のための現在のプロトコルに改良を提供すると結論付けています。

Zebrafish are frequently used as a means to investigate development. These studies increasingly require repeated anaesthesia of zebrafish during juvenile (i.e. metamorphic) stages. The effects of anaesthesia during this time remain poorly studied. The aim of this study was to develop a reliable method that can be used for frequently repeated anaesthesia during juvenile stages. Initially, we assessed different concentrations of MS-222, the most commonly used fish anaesthetic, for 30 minute anaesthesia with recovery. We showed that suitable MS-222 doses could be identified for the smallest (7mm) and largest (20mm) fish. However, we found that juvenile fish within a specific metamorphic window (sized between 8-16 mm) were vulnerable to MS-222 and no standard concentration of MS-222 provided reliable anaesthesia under these conditions. Hence we focussed our efforts on identifying a protocol for these stages. We tested six different published anaesthesia protocols P1-P6 where P1, P2 corresponds to 0.01% MS-222, P3, P4: 0.085% 2-phenoxyethanol and P5, P6: 0.00025%/0.0050% Propofol/Lidocaine. In protocols P1, P3, P5 fish were maintained by immersion, whilst in P2, P4 and P6: fish were maintained on an anaesthetic-doused cotton-pad. We assessed reliable anaesthesia using 10 fish for 10 minutes, with full recovery. Our data allowed us to eliminate two of these protocols as unsuitable for short term anaesthesia with recovery of juvenile fish. Extending these studies to explore repeated anaesthesia at 4 day intervals for 20 days under the remaining four protocols, we showed that P1 and P4 were both suitable for repeated anaesthesia, and that P4 was most suitable for imaging. We confirmed that P4 remained suitable when the frequency of anaesthesia was increased to every 2 days. We conclude that this protocol provides a refinement to the current protocol for repeated anaesthesia with recovery of juvenile zebrafish in the vulnerable metamorphic window.