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最近の証拠は、炎症性および酸化ストレスメカニズムを介した心血管疾患の病態生理学におけるトリプトファン（TRP）代謝産物の関連する役割を示しています。したがって、生物学的サンプルにおけるTRPとその代謝産物の定量化は、疾患メカニズムを解明するための強力なツールになります。この研究の目的は、TRPとその代謝物（L-キヌレニン（Kyn）およびキヌレン酸（KA）の定量化のための紫外線（UV）および蛍光検出（FD）（LCUV/FD）法を使用した液体クロマトグラフィーを開発および検証することでした））心不全（HF）患者からの尿サンプル。生化学的パラメーターと炎症マーカーが定量化され、データはTRPおよびその代謝産物の尿濃度と相関していました。最適化されたクロマトグラフィー条件は、LUNA®3μMPFP（2）分析カラム、ウルトラピュア水中の20 mmの形成アンモニウム（ギ酸の0.01％）、アセトニトリル、エタノール（95/2/3の移動相）を使用して達成されました。、v/v/v）、0.7 ml/minの流量、25°Cに設定されたカラムオーブン温度。この方法は、欧州医薬品局（EMA）のガイドラインに従って検証され、線形（R2> 0.99）、正確（82-116％）、および正確（15％未満のRSD％）であることが示されました。定量化の限界は50〜125 ng/mLの間で変化しました。この方法は、健康なボランティアおよび男性HF患者におけるTRP、Kyn、KAの定量化に適用されました。このパイロット研究（患者の小グループ）を通じて得られた結果は、生化学的パラメーター、炎症マーカー、TRP、Kyn、KAの濃度の変化との関係を示しました。Kyn/TRPおよびKa/Kyn比が計算されました。結果は、Kyn/TRP比が酵素活性に関連しており、Ka/Kyn比が優れた神経保護指標になる可能性があるという仮説を支持しています。心臓患者における選択された化合物のモニタリングのためのLCUV/FD法の可能性も実証されました。
最近の証拠は、炎症性および酸化ストレスメカニズムを介した心血管疾患の病態生理学におけるトリプトファン（TRP）代謝産物の関連する役割を示しています。したがって、生物学的サンプルにおけるTRPとその代謝産物の定量化は、疾患メカニズムを解明するための強力なツールになります。この研究の目的は、TRPとその代謝物（L-キヌレニン（Kyn）およびキヌレン酸（KA）の定量化のための紫外線（UV）および蛍光検出（FD）（LCUV/FD）法を使用した液体クロマトグラフィーを開発および検証することでした））心不全（HF）患者からの尿サンプル。生化学的パラメーターと炎症マーカーが定量化され、データはTRPおよびその代謝産物の尿濃度と相関していました。最適化されたクロマトグラフィー条件は、LUNA®3μMPFP（2）分析カラム、ウルトラピュア水中の20 mmの形成アンモニウム（ギ酸の0.01％）、アセトニトリル、エタノール（95/2/3の移動相）を使用して達成されました。、v/v/v）、0.7 ml/minの流量、25°Cに設定されたカラムオーブン温度。この方法は、欧州医薬品局（EMA）のガイドラインに従って検証され、線形（R2> 0.99）、正確（82-116％）、および正確（15％未満のRSD％）であることが示されました。定量化の限界は50〜125 ng/mLの間で変化しました。この方法は、健康なボランティアおよび男性HF患者におけるTRP、Kyn、KAの定量化に適用されました。このパイロット研究（患者の小グループ）を通じて得られた結果は、生化学的パラメーター、炎症マーカー、TRP、Kyn、KAの濃度の変化との関係を示しました。Kyn/TRPおよびKa/Kyn比が計算されました。結果は、Kyn/TRP比が酵素活性に関連しており、Ka/Kyn比が優れた神経保護指標になる可能性があるという仮説を支持しています。心臓患者における選択された化合物のモニタリングのためのLCUV/FD法の可能性も実証されました。
Recent evidence indicates the relevant role of the tryptophan (TRP) metabolites in the pathophysiology of cardiovascular diseases via inflammatory and oxidative stress mechanisms. Therefore, quantification of TRP and its metabolites in biological samples can be a powerful tool to elucidate the disease mechanisms. The aim of this work was to develop and validate a liquid chromatography with ultraviolet (UV) and fluorescence detection (FD) (LCUV/FD) method for the quantification of TRP and its metabolites (L-kynurenine (KYN) and kynurenic acid (KA)) in urine samples from heart failure (HF) patients. Biochemical parameters and inflammatory markers were quantified, and data correlated with urinary concentrations of TRP and its metabolites. Optimized chromatographic conditions were achieved using a Luna® 3 μm PFP(2) analytical column, a mobile phase of 20 mM of ammonium formate in ultra-pure water (with 0.01 % of formic acid), acetonitrile and ethanol (95/2/3, v/v/v), a flow rate of 0.7 mL/min and a column oven temperature set at 25 °C. The method was validated according to the European Medicines Agency (EMA) guidelines and showed to be linear (r2 >0.99), accurate (82-116%) and precise (%RSD below 15 %). The limits of quantification varied between 50 and 125 ng/mL. The method was applied to the quantification of TRP, KYN and KA in healthy volunteers and male HF patients. The results obtained through this pilot study (small group of patients) showed a relationship between biochemical parameters, inflammatory markers and changes in the concentration of TRP, KYN and KA. The KYN/TRP and KA/KYN ratios were calculated. Results support the hypothesis that KYN/TRP ratio is related with enzymatic activity and that KA/KYN ratio can be a good neuroprotection indicator. The potential of the LCUV/FD method for the monitoring of the selected compounds in cardiac patients was also demonstrated.
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