ラテックス粒子強化タービジメトリック免疫測定法を介した抗シトリリンタンパク質抗体の測定のための環状シトルリン化ペプチド固定化ラテックスビーズの調製と特性評価

抗シトリリンタンパク質抗体（ACPA）は、関節リウマチ（RA）の早期診断に重要な役割を果たし、抗原として環状シトルリン化ペプチド（CCP）を使用することで通常検出されます。CCPテストに対するACPAは通常、酵素結合免疫吸着アッセイ（ELISA）を利用して実行されますが、ELISAは高価で時間がかかります。ここでは、CCPに固定されたラテックスビードに基づくラテックス粒子強化タービディメトリック免疫測定法（LTIA）が、RA患者のACPAの高速測定のために提案されました。CCPに固定されたラテックスビーズは、直接結合、全体的な結合、層による層を含む3つの方法で製造されました。最適化された実験によると、層ごとの結合は、時間を節約、単純な操作、優れた再現性の利点を備えた最良の方法でした。さらに、ラテックスビーズとCCPの間の適切な長さのスペーサーアームは、立体障害のある障害を回避し、ACPAをCCPに近づけることができます。レイヤーバイレイヤーカップリング（CCP-LB-LLC）に基づいたCCPに固定されたラテックスビーズは、自家製キットの組み立てに使用されました。自家製キットには、最低限の検出（0.2 U/mL）があり、バッチからバッチまでの再現性を許容できるものがありました。さらに、自家製キットは、4°Cで少なくとも1か月保管できます。20の臨床サンプルを検出するために使用されると、自家製キットの結果は市販のELISAと一致していました。さらに、自家製キットに基づくLTIAは、ELISAよりもシンプルで安価でした。これらの結果は、自家製のキットがRA患者の診断に役立つ可能性があることを実証しました。

The anti-citrillinated protein antibody (ACPA) plays an important role in early diagnosis of rheumatoid arthritis (RA), and is usually detected by using cyclic citrullinated peptide (CCP) as antigen. The ACPA against CCP test is usually performed utilizing enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), but the ELISA is expensive and time-consuming. Here, latex particle-enhanced turbidimetric immunoassay (LTIA) based on CCP-immobilized latex bead was proposed for fast measurements of ACPA of RA patients. CCP-immobilized latex bead was fabricated through three methods, including direct coupling, overall coupling and layer by layer coupling. According to the optimized experiments, layer-by-layer coupling was the best method with advantages of time-saving, simple operation and good repeatability. In addition, a spacer arm of appropriate length between latex beads and CCP could avoid stereoscopic obstacles and make ACPA closer to CCP. The CCP-immobilized latex bead based on layer by layer coupling (CCP-LB-LLC) was used for assembling the homemade kit, which was applied in fast measurements of ACPA through LTIA. The homemade kit possessed a low limit of detection (0.2 U/mL) and an acceptable the batch-to-batch reproducibility. In addition, the homemade kit can be stored at 4 °C for at least one month. When used to detect 20 clinical samples, the results of homemade kit were consistent with commercial ELISA. Furthermore, LTIA based on the homemade kit was simpler and cheaper than ELISA. These results demonstrated that the homemade kit could be useful for diagnosis of RA patients.