糖尿病性腎症および他の腎臓路疾患の臨床サンプルにおける尿中アルブミンの高度に選択的な検出のためのアプタマー官能化磁気粒子

アプタマー官能化された磁気粒子に基づいて、尿中のヒトアルブミン（HA）の新しい高選択的検出プラットフォームを報告します。磁気分離と再分散を利用して、HA結合粒子をメチレンブルー溶液に曝露しました。次に、2番目の磁気収集ステップを使用して、メチレンブルー上清を、変更されていないスクリーンプリント電極で還元できるようにしました。メチレンブルーはHAに吸着するため、減少電流はHA濃度に比例して低下しました。ドーパミン、エピネフリン、バニリルマンデル酸、ノルメタネフリン、メタネフリン、メタネフリン、およびそれらが出現すると予想される濃度の人工尿中のクレアチニンなどの化合物からの干渉はありませんでした。応答に対するpHの効果を可能にするために、キャリブレーション方程式が導出されました。これにより、さまざまなpHの臨床尿サンプルで直接測定することができました。実験パラメーターの最適化後、合計アッセイ時間は40分で、検出の制限は、使用するpHに応じて0.93〜1.16μgml-1でした。HAは、正常アルブミン尿からマクロアルブミン尿まで、最大400μgML-1まで検出できます。地元の病院からの糖尿病性腎症、I型およびII糖尿病および慢性腎疾患を伴う患者の尿サンプルの分析は、標準的な尿アルブミン検出方法と良好な一致を示しました。

We report a new highly selective detection platform for human albumin (HA) in urine based on aptamer-functionalised magnetic particles. Magnetic separation and re-dispersion was utilised to expose the HA-bound particles to a methylene blue solution. A second magnetic collection step was then used to allow the methylene blue supernatant to be reduced at an unmodified screen-printed electrode. Since methylene blue adsorbs to HA, the reduction current fell in proportion to HA concentration. There was no interference from compounds such as dopamine, epinephrine, vanillylmandelic acid, normetanephrine, metanephrine and creatinine in artificial urine at the concentrations at which they would be expected to appear. A calibration equation was derived to allow for the effect of pH on the response. This enabled measurement to be made directly in clinical urine samples of varying pH. After optimisation of experimental parameters, the total assay time was 40 min and the limit of detection was between 0.93 and 1.16 μg mL-1, depending on the pH used. HA could be detected up to 400 μg mL-1, covering the range from normoalbuminuria to macroalbuminuria. Analysis of urine samples of patients, with diabatic nephropathy, type I & II diabetes mellitus and chronic kidney disease, from a local hospital showed good agreement with the standard urinary human albumin detection method.