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癌細胞の治療効率の低下につながるタンパク質を認識することは、生物医学および生物工学の研究と応用の主な目標となります。治療研究と薬物/化合物スクリーニングには、安定して意欲的な遺伝子を過剰発現する組換え細胞を確立することが重要です。サバイビンは抗アポトーシスタンパク質であり、細胞死と生存を調節するための潜在的な候補になる可能性があります。サバイビン増分とアポトーシス率との関連を調査するために、サバイビンが再構成したHEK（HEK-S）細胞がin vitroモデルとして開発されました。RT-PCRとウエスタンブロットは、サバイビンがHEK-S細胞で構成的に過剰発現していることを実証しました。形態学的観察と生存アッセイの両方が、HEK-S細胞がアポトーシス刺激に対して有意に耐性があることを示しました。サバイビンの過剰発現は、カスパーゼ3/7活性の減少をもたらしましたが、YM155はカスパーゼ活性の対応する強化をもたらしました。ROSレベルは低下しましたが、HEK-S細胞ではATP含有量が増加しました。また、HEK-Sは、刺激後のHEKと比較して、赤蛍光が少なく、細胞増殖の減少を示しました。レーザー照射に対する耐性は、コントロールと比較してはっきりと見えました。さらに、スクラッチ分析により、サバイビンが隣接する細胞が薬物に対する耐性を増加させる能力が示されましたが、YM155はHEK-S細胞のアポトーシス速度を高め、浸潤を減少させました。
癌細胞の治療効率の低下につながるタンパク質を認識することは、生物医学および生物工学の研究と応用の主な目標となります。治療研究と薬物/化合物スクリーニングには、安定して意欲的な遺伝子を過剰発現する組換え細胞を確立することが重要です。サバイビンは抗アポトーシスタンパク質であり、細胞死と生存を調節するための潜在的な候補になる可能性があります。サバイビン増分とアポトーシス率との関連を調査するために、サバイビンが再構成したHEK（HEK-S）細胞がin vitroモデルとして開発されました。RT-PCRとウエスタンブロットは、サバイビンがHEK-S細胞で構成的に過剰発現していることを実証しました。形態学的観察と生存アッセイの両方が、HEK-S細胞がアポトーシス刺激に対して有意に耐性があることを示しました。サバイビンの過剰発現は、カスパーゼ3/7活性の減少をもたらしましたが、YM155はカスパーゼ活性の対応する強化をもたらしました。ROSレベルは低下しましたが、HEK-S細胞ではATP含有量が増加しました。また、HEK-Sは、刺激後のHEKと比較して、赤蛍光が少なく、細胞増殖の減少を示しました。レーザー照射に対する耐性は、コントロールと比較してはっきりと見えました。さらに、スクラッチ分析により、サバイビンが隣接する細胞が薬物に対する耐性を増加させる能力が示されましたが、YM155はHEK-S細胞のアポトーシス速度を高め、浸潤を減少させました。
Recognizing proteins that lead to a decreased efficiency of treatment in cancer cells constitutes a main goal for biomedical and biotechnological research and applications. Establishing recombinant cells that overexpress a gene of interest stably is important for treatment studies and drug/compound screening. Survivin is an anti-apoptotic protein which can be a potential candidate for regulating cell death and survival. To investigate the association between survivin increment and apoptosis rate, survivin-reconstituted HEK (HEK-S) cell was developed as in vitro model. RT-PCR and Western blot demonstrated that survivin was constitutively overexpressed in HEK-S cells. Both morphological observation and survival assay showed that HEK-S cells were significantly resistant to apoptotic stimuli. Survivin overexpression led to a decrease in caspase 3/7 activity, whereas YM155 led to a corresponding enhance of caspase activity. ROS level was decreased but ATP content increased in HEK-S cells. Also, HEK-S showed less red- fluorescence and reduced cell proliferation compared to HEK after stimulation. Resistance to laser irradiation was clearly visible as compared with control. Moreover, scratching analysis demonstrated the ability of survivin to cause neighboring cells to increase resistance to drug, whereas YM155 enhanced apoptotic rate and declined invasion in HEK-S cells.
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