リパーゼおよびエステラーゼ活性のピコグラム検出のためのザイモグラフィー

リパーゼとエステラーゼは、幅広い産業用途を持つ重要な触媒です。活動を検出するために多くの方法が確立されていますが、脂肪分解酵素量のピコグラム検出のための単純で敏感なアプローチは依然として非常に望ましいものです。ここでは、以前に報告された方法よりも1000倍の感度が高いリパーゼ検出アッセイを報告します。私たちのアッセイにより、直接斑点とザイモグラフィによる5 pgと180 pgの脂肪分解活性をそれぞれ検出できます。さらに、緩衝能力を変化させることにより、検出感度が調整可能であることを実証しました。液体クロマトグラフィマス分光測定と相まって、この方法は、脂肪分解酵素の高感度検出と同定のための有用なツールを提供します。

Lipases and esterases are important catalysts with wide varieties of industrial applications. Although many methods have been established for detecting their activities, a simple and sensitive approach for picogram detection of lipolytic enzyme quantity is still highly desirable. Here we report a lipase detection assay which is 1000-fold more sensitive than previously reported methods. Our assay enables the detection of as low as 5 pg and 180 pg of lipolytic activity by direct spotting and zymography, respectively. Furthermore, we demonstrated that the detection sensitivity was adjustable by varying the buffering capacity, which allows for screening of both high and low abundance lipolytic enzymes. Coupled with liquid chromatography-mass spectrometry, our method provides a useful tool for sensitive detection and identification of lipolytic enzymes.