定量的31p-NMRおよびメソッド検証によるシクロホスファミド水和物の純度決定

最近、定量的NMR（QNMR）、特に1H-QNMRは、有機分子の絶対定量値を決定するために広く使用されています。以前に、1H-QNMRの最適で再現可能なサンプル調製方法を報告しました。本研究では、31P-QNMR絶対決定方法に焦点を当てました。日本のファルマコペア第17版にリストされている有機リン化合物であるシクロホスファミド水和物（CP）が標的化合物として選択され、31P-QNMRおよび1H-QNMRの結果は、3つの条件下で3つの条件下でリン酸カリウム（KH2PO4）またはO-ホモリロテノールアミンミネジンの結果を比較しました。（PEA）1H-QNMRの標準としての31p-QNMRおよびナトリウム4,4-ジメチル-4-ジラペンタンスルホン酸-D6（DSS-D6）の参照標準として。条件1：31P-QNMRまたはCPおよびCPとDSS-D6を1H-QNMRで含むCPとKH2PO4を含む個別のサンプル。条件2：CP、DSS-D6、およびKH2PO4を含む混合サンプル。条件3：CP、DSS-D6、およびPEAを含む混合サンプル。条件1と3が良好な結果をもたらしたため、複数の研究所での検証研究がさらに実施されました。CPの純度は、11の実験室で1H-QNMR、10の実験室で31p-QNMRで条件1で決定された純度は、それぞれ99.76±0.43および99.75±0.53％であり、5つの研究所で条件3で決定されたものは99.66±0.08および99.61±±99.61でした。それぞれ0.53％。これらのデータは、31P-QNMRによって決定されたCP純度が、確立された1H-QNMRメソッドによって決定されたものとよく一致していることを示唆しています。31P-QNMR信号は1H-QNMR信号よりも複雑ではないため、31P-QNMRは、シングレットやダブレットなどの単純で個別の1H-QNMR信号を持たない化合物の絶対定量化に役立ちますが、さらに他の化合物との調査が必要です。

Recently, quantitative NMR (qNMR), especially 1H-qNMR, has been widely used to determine the absolute quantitative value of organic molecules. We previously reported an optimal and reproducible sample preparation method for 1H-qNMR. In the present study, we focused on a 31P-qNMR absolute determination method. An organophosphorus compound, cyclophosphamide hydrate (CP), listed in the Japanese Pharmacopeia 17th edition was selected as the target compound, and the 31P-qNMR and 1H-qNMR results were compared under three conditions with potassium dihydrogen phosphate (KH2PO4) or O-phosphorylethanolamine (PEA) as the reference standard for 31P-qNMR and sodium 4,4-dimethyl-4-silapentanesulfonate-d6 (DSS-d6) as the standard for 1H-qNMR. Condition 1: separate sample containing CP and KH2PO4 for 31P-qNMR or CP and DSS-d6 for 1H-qNMR. Condition 2: mixed sample containing CP, DSS-d6, and KH2PO4. Condition 3: mixed sample containing CP, DSS-d6, and PEA. As conditions 1 and 3 provided good results, validation studies at multiple laboratories were further conducted. The purities of CP determined under condition 1 by 1H-qNMR at 11 laboratories and 31P-qNMR at 10 laboratories were 99.76 ± 0.43 and 99.75 ± 0.53%, respectively, and those determined under condition 3 at five laboratories were 99.66 ± 0.08 and 99.61 ± 0.53%, respectively. These data suggested that the CP purities determined by 31P-qNMR are in good agreement with those determined by the established 1H-qNMR method. Since the 31P-qNMR signals are less complicated than the 1H-qNMR signals, 31P-qNMR would be useful for the absolute quantification of compounds that do not have a simple and separate 1H-qNMR signal, such as a singlet or doublet, although further investigation with other compounds is needed.