CRISPR-CAS13による増幅フリーRNA検出

CRISPRベースの核酸検出は、分子診断のための新しい技術です。ただし、これらの方法は一般に数時間かかり、標的核酸の事前増幅により検出感度を高めるため、増幅エラーを引き起こす可能性があります。ここでは、CRISPR-CAS13ベースのRNA検出とマイクロチャンバーアレイテクノロジーを組み合わせて、「CRISPRベースの増幅フリーデジタルRNA検出（Satori）」を許可するプラットフォームを開発しました。Satoriは、5分未満で〜10 FMの最大感度で、特異性が高い一本鎖RNA標的を検出しました。さらに、複数の異なるガイドRNAの同時使用により感度が向上し、5 FMレベルでSARS-COV-2 N遺伝子RNAの検出が可能になりました。したがって、Satoriが正確で迅速な診断の強力なクラスとして機能することを願っています。

CRISPR-based nucleic-acid detection is an emerging technology for molecular diagnostics. However, these methods generally require several hours and could cause amplification errors, due to the pre-amplification of target nucleic acids to enhance the detection sensitivity. Here, we developed a platform that allows "CRISPR-based amplification-free digital RNA detection (SATORI)", by combining CRISPR-Cas13-based RNA detection and microchamber-array technologies. SATORI detected single-stranded RNA targets with maximal sensitivity of ~10 fM in <5 min, with high specificity. Furthermore, the simultaneous use of multiple different guide RNAs enhanced the sensitivity, thereby enabling the detection of the SARS-CoV-2 N-gene RNA at ~5 fM levels. Therefore, we hope SATORI will serve as a powerful class of accurate and rapid diagnostics.