ラット小腸からの刷子縁膜小胞によるチアミンの輸送

1. 成体ウィスターアルビノラットの腸から Ca2+ 沈殿法によって得られた微絨毛小胞を、高比活性の [35S]- または [3H] チアミンとともに 25℃でインキュベートしました。2. チアミン取り込みの時間経過は、Na + または K + の存在にも、インキュベーション培地中のアルカリ性陽イオンの不在にも影響されませんでした。3. 1.25 μM 未満の濃度では、チアミンは主に飽和機構によって取り込まれ、見かけの Km = 0.8 μM および Vmax = 0.35 pmol mg タンパク質 -1 4 s-1 でした。より高い濃度では、非飽和性の取り込みメカニズムが優勢でした。4. 取り込まれたチアミンは膀胱内空間に移動しました。小胞中にチアミンリン酸エステルは検出されませんでした。5. チアミンの小胞輸送は、以下を含むいくつかのチアミン誘導体および構造類似体によって競合的に阻害されました。チアミン一リン酸（阻害定数、Ki = 33 microM）;ピリチアミン (Ki = 1.7 マイクロM);2'-エチルチアミン (Ki = 27 マイクロM);5-クロロエチルチアミン (Ki = 70 マイクロM): アンプロリウム (Ki = 55 マイクロM);4'-オキシチアミン (Ki = 510 microM)。

1. Microvillous vesicles obtained by a Ca2+ precipitation method from the intestine of adult Wistar albino rats were incubated at 25 degrees C with [35S]- or [3H]thiamine of high specific activity. 2. The time course of thiamine uptake was not influenced by the presence of Na+ or K+ nor by the absence of alkaline cations in the incubation medium. 3. At concentrations below 1.25 microM, thiamine was taken up mainly by a saturable mechanism with apparent Km = 0.8 microM and Vmax = 0.35 pmol mg protein-1 4 s-1. At higher concentrations, a non-saturable uptake mechanism prevailed. 4. The thiamine taken up was transferred to the intravesicular space. No thiamine phosphoesters could be detected in the vesicles. 5. The vesicular transport of thiamine was inhibited competitively by several thiamine derivatives and structural analogues, including: cold thiamine; thiamine monophosphate (inhibition constant, Ki = 33 microM); pyrithiamine (Ki = 1.7 microM); 2'-ethylthiamine (Ki = 27 microM); 5-chloroethylthiamine (Ki = 70 microM): Amprolium (Ki = 55 microM); 4'-oxythiamine (Ki = 510 microM).