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Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America1988Jul01Vol.85issue(14)

表皮成長因子受容体遺伝子にアクティブな転写因子

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文献タイプ:
  • Journal Article
概要
Abstract

EGFRを過剰生産するA431ヒト上皮癌細胞の核抽出物を使用することにより、表皮成長因子受容体(EGFR)癌遺伝子のin vitro転写システムを開発しました。EGFR特異的転写因子(ETF)と呼ばれる核因子が、特異的にEGFR転写を5〜10倍刺激したことがわかりました。このレポートでは、シーケンス特異的オリゴヌクレオチドアフィニティクロマトグラフィーを使用して精製されたETFは、ナドドソ4/ポリアクリルアミドゲルから溶出した材料をレネチングすることにより示され、120 kDaの分子量を持つタンパク質になります。ETFは、DNase I「フットプリント」およびゲルモビリティシフトアッセイで測定されるように、プロモーター領域に結合し、in vitro転写システムにおけるEGFR遺伝子の転写を特異的に刺激します。これらの結果は、ETFが細胞癌遺伝子EGFRの過剰発現に役割を果たすことができることを示唆しています。

EGFRを過剰生産するA431ヒト上皮癌細胞の核抽出物を使用することにより、表皮成長因子受容体(EGFR)癌遺伝子のin vitro転写システムを開発しました。EGFR特異的転写因子(ETF)と呼ばれる核因子が、特異的にEGFR転写を5〜10倍刺激したことがわかりました。このレポートでは、シーケンス特異的オリゴヌクレオチドアフィニティクロマトグラフィーを使用して精製されたETFは、ナドドソ4/ポリアクリルアミドゲルから溶出した材料をレネチングすることにより示され、120 kDaの分子量を持つタンパク質になります。ETFは、DNase I「フットプリント」およびゲルモビリティシフトアッセイで測定されるように、プロモーター領域に結合し、in vitro転写システムにおけるEGFR遺伝子の転写を特異的に刺激します。これらの結果は、ETFが細胞癌遺伝子EGFRの過剰発現に役割を果たすことができることを示唆しています。

We have developed an in vitro transcription system for the epidermal growth factor receptor (EGFR) oncogene by using nuclear extracts of A431 human epidermoid carcinoma cells, which overproduce EGFR. We found that a nuclear factor, termed EGFR-specific transcription factor (ETF), specifically stimulated EGFR transcription by 5- to 10-fold. In this report, ETF, purified by using sequence-specific oligonucleotide affinity chromatography, is shown by renaturing material eluted from a NaDodSO4/polyacrylamide gel to be a protein with a molecular mass of 120 kDa. ETF binds to the promoter region, as measured by DNase I "footprinting" and gel-mobility-shift assays, and specifically stimulates the transcription of the EGFR gene in a reconstituted in vitro transcription system. These results suggest that ETF could play a role in the overexpression of the cellular oncogene EGFR.

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