高分子複合体精製を促進するためのCRISPR-CAS9システムでの遺伝子タグ付け

目的のタグ付けされたタンパク質を発現する修飾された細胞株を生成する必要性がますます重要になっています。ここでは、容易なCRISPR/CAS9を介した遺伝子タグ付けと修飾細胞の分離のための詳細なプロトコルについて説明します。このプロトコルでは、CRISPR/CAS9を介した遺伝子タグ付けを促進する2つの以前に公開された戦略を組み合わせます。化学的に修飾された一本鎖オリゴヌクレオチドをドナーテンプレートとして使用し、ATP1A1遺伝子を対象とする共選択戦略を使用します。全体として、ここで提案されているプロトコルは両方とも簡単であり、対象のタンパク質を発現する細胞を生成するための他のアプローチと比較して時間を節約します。これは、ヒト細胞から天然の複合体を精製するために重要です。

The need to generate modified cell lines that express tagged proteins of interest has become increasingly important. Here, we describe a detailed protocol for facile CRISPR/Cas9-mediated gene tagging and isolation of modified cells. In this protocol, we combine two previously published strategies that promote CRISPR/Cas9-mediated gene tagging: using chemically modified single-stranded oligonucleotides as donor templates and a co-selection strategy targeting the ATP1A1 gene at the same time as the gene of interest. Altogether, the protocol proposed here is both easier and saves time compared to other approaches for generating cells that express tagged proteins of interest, which is crucial to purify native complex from human cells.