インフルエンザウイルス抗原をコードする修飾mRNA-ワクチンバリアントの構造と免疫原性

核酸ベースのインフルエンザワクチンは、最近かつ急速に発達した有望なプラットフォームです。以前に、インフルエンザA-H1N1およびH3N2およびH3N2と保存タンパク質M2の2つのサブタイプのヘマグルチニン茎の保存された断片を含む、人工免疫原性AGH1、AGH3、およびAGM2をコードするDNAワクチンの免疫原性を実証しました。したがって、この研究の目的は、上記のプラスミドDNAワクチンをテンプレートとして使用して得られた修正されたmRNAを設計および特性化することでした。高度に免疫原性mRNAワクチンを作成するための最も有望なプロトコルを選択するために、翻訳活動を増加させ、毒性を低下させることを目的としたmRNA修飾の比較分析を実行しました。緑色の蛍光タンパク質（GFP）をモデルとしてコードするmRNAを使用しました。異なる修飾（M0-M7）を持つ8つのmRNA-GFPバリアントは、古典的なCAP（1）、その化学アナログARCA（抗リバースキャップアナログ）、シュードリジン（ψ）、N6-メチルアデノシン（M6A）、および5-を使用して得られました。異なる比率のメチルシトシン（M5C）。mRNAがインフルエンザ免疫原性AGH1、AGH3、およびAGM2をコードした場合、トランスフェクトされたHEK293FT細胞の最も集中的な蛍光を提供したM2、M6、およびM7は、テンプレート合成に使用されました。ウイルス特異的抗体は、AGH1、AGH3、およびAGM2をコードするmRNAの混合物で免疫した動物のグループで登録されました。uを100％置換してψ（M7））。M6の修飾は、他のmRNAバリアントと比較した場合、最も毒性が最も低かった。したがって、M6およびM7 RNAの修飾は、mRNAワクチンを設計するための有望なプロトコルと見なすことができます。

Nucleic acid-based influenza vaccines are a promising platform that have recently and rapidly developed. We previously demonstrated the immunogenicity of DNA vaccines encoding artificial immunogens AgH1, AgH3, and AgM2, which contained conserved fragments of the hemagglutinin stem of two subtypes of influenza A-H1N1 and H3N2-and conserved protein M2. Thus, the aim of this study was to design and characterize modified mRNA obtained using the above plasmid DNA vaccines as a template. To select the most promising protocol for creating highly immunogenic mRNA vaccines, we performed a comparative analysis of mRNA modifications aimed at increasing its translational activity and decreasing toxicity. We used mRNA encoding a green fluorescent protein (GFP) as a model. Eight mRNA-GFP variants with different modifications (M0-M7) were obtained using the classic cap(1), its chemical analog ARCA (anti-reverse cap analog), pseudouridine (Ψ), N6-methyladenosine (m6A), and 5-methylcytosine (m5C) in different ratios. Modifications M2, M6, and M7, which provided the most intensive fluorescence of transfected HEK293FT cells were used for template synthesis when mRNA encoded influenza immunogens AgH1, AgH3, and AgM2. Virus specific antibodies were registered in groups of animals immunized with a mix of mRNAs encoding AgH1, AgH3, and AgM2, which contained either ARCA (with inclusions of 100% Ψ and 20% m6A (M6)) or a classic cap(1) (with 100% substitution of U with Ψ (M7)). M6 modification was the least toxic when compared with other mRNA variants. M6 and M7 RNA modifications can therefore be considered as promising protocols for designing mRNA vaccines.