Mini-R1（RSC）プラスミドからの移動因子への無傷、削除、拡大のアンピシリントランスポゾンTN3の転位と挿入

コピー変異体R1DRD-19b2（PKN102）に由来するMINIR1-（RSC） - プラスミドは、標準的な幹条件下でのレシピエント株へのさまざまな移動因子によって共謀することはできません。F'LACによってRSC11を動員しようとする試みは、主にLACオペロンに挿入されたTN3を使用してF'lac :: TN3を運ぶトランスコンジュガンにつながります。さらに、RSC11は、かなり不安定な組換え中間体を引き起こす移動因子に完全なユニットとして挿入できることを示すことができます。これらの中間体の解離は、元のプラスミドの変化につながる可能性があります。RSC13のTN3部分は、in vitro操作によって拡大または削除できます。TN3のECORI+部位へのecori fragmentsのin vitro挿入は、R1のRTF部分に転置できる新しい転位ユニットにつながります。この新しい遺伝的存在は、DNAATS-Mutationの統合抑制により、大腸菌の染色体に安定して統合できます。TN3の一端または中央領域の削除は、転置の能力を廃止します。ただし、削除されたTN3を含むRSCプラスミドは、完全なユニットとして転送係数に挿入できます。結果として得られる組換えは、特性が変化した新しいプラスミドへの解離後にリードする不安定です。

The miniR1-(Rsc)-plasmids which derive from the copy mutant R1drd-19B2 (pKN102) are non-conjugative extrachromosomal elements which can not be co-transferred by various transfer factors to recipient strains under standard mating conditions. The attempts to mobilize Rsc11 by F'lac lead to transconjugants carrying F'lac::Tn3 with Tn3 mainly inserted into the lac operon. In addition it can be shown that Rsc11 can become inserted as a complete unit into the transfer factor giving rise to rather unstable recombinant intermediates. Dissociation of these intermediates may lead to alterations of the original plasmids. The Tn3 part of Rsc13 can be enlarged or deleted by in vitro manipulations. In vitro insertion of EcoRI-fragments into an EcoRI+ site of Tn3 leads to new transposable units which can be transposed to the RTF part of R1. This new genetic entity can be stably integrated into the chromosome of E. coli by integrative suppression of a dnaAts-mutation. Deletions at one end or the central region of Tn3 abolish the capability of transposition. However, the Rsc-plasmids containing the deleted Tn3 can still be inserted into the transfer factor as complete units. The resulting recombinants are unstable leading after dissociation in some cases to new plasmids with altered properties.