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カンピロバクターは、世界中の食物媒介性ヒト下痢の主な原因です。実行可能だが培養不能（VBNC）状態のこの微生物は、日常的に使用された培養ベースの方法による検出を回避し、長期間にわたって実行可能であり続けることができます。この休眠状態の細菌は、好ましい条件下で蘇生により代謝活動と毒性を再開し、その後感染を引き起こす可能性があります。この研究では、ループを介した等温増幅（LAMP）とモノアジドプロピジウム（PMA）治療を組み合わせたアッセイが、農業食品におけるVBNC C. jejuniの検出と定量化のために開発されました。HIPO遺伝子を標的とするPMA-QLAMPは、C。jejuniに対して100％高い特異性を示しました。C. jejuniの線形検出は、0.9956の測定係数（R2）で8.77×102から8.77×07 CFU/mlの間で達成され、良好な定量的能力を示しています。C. jejuniは、48時間にわたって浸透圧ストレス（すなわち、7％NaCl、w/v）によってVBNC状態に効果的に誘導されました。VBNC C.ジェジュニ細胞は、3つの代表的な食品にスパイクされ、メッキアッセイと結合したPMA-QLAMPによって決定されました。PMA-QLAMPの検出限界は、牛乳で1.58×102 cfu/ml、鶏肉肉の中で3.78×102 cfu/g、ロメインレタスで4.33×102 cfu/gでした。PMA-QLAMPは、VBNC C. jejuniの迅速な（25〜40分）、特異的（100％包括性と100％排他性）および敏感な（〜102 CFU/ml）測定を実証しました。この方法は、農業食品産業に適用して、VBNC状態の汚染された農業食品の消費に関連するリスクを減らし、C。jejuni感染症の負担を軽減することができます。
カンピロバクターは、世界中の食物媒介性ヒト下痢の主な原因です。実行可能だが培養不能（VBNC）状態のこの微生物は、日常的に使用された培養ベースの方法による検出を回避し、長期間にわたって実行可能であり続けることができます。この休眠状態の細菌は、好ましい条件下で蘇生により代謝活動と毒性を再開し、その後感染を引き起こす可能性があります。この研究では、ループを介した等温増幅（LAMP）とモノアジドプロピジウム（PMA）治療を組み合わせたアッセイが、農業食品におけるVBNC C. jejuniの検出と定量化のために開発されました。HIPO遺伝子を標的とするPMA-QLAMPは、C。jejuniに対して100％高い特異性を示しました。C. jejuniの線形検出は、0.9956の測定係数（R2）で8.77×102から8.77×07 CFU/mlの間で達成され、良好な定量的能力を示しています。C. jejuniは、48時間にわたって浸透圧ストレス（すなわち、7％NaCl、w/v）によってVBNC状態に効果的に誘導されました。VBNC C.ジェジュニ細胞は、3つの代表的な食品にスパイクされ、メッキアッセイと結合したPMA-QLAMPによって決定されました。PMA-QLAMPの検出限界は、牛乳で1.58×102 cfu/ml、鶏肉肉の中で3.78×102 cfu/g、ロメインレタスで4.33×102 cfu/gでした。PMA-QLAMPは、VBNC C. jejuniの迅速な（25〜40分）、特異的（100％包括性と100％排他性）および敏感な（〜102 CFU/ml）測定を実証しました。この方法は、農業食品産業に適用して、VBNC状態の汚染された農業食品の消費に関連するリスクを減らし、C。jejuni感染症の負担を軽減することができます。
Campylobacter is the leading cause of foodborne human diarrhea worldwide. This microbe in the viable but non-culturable (VBNC) state can evade detection by routinely used culture-based methods and remain viable for extended periods of time. Bacteria in this dormancy state can resume their metabolic activity and virulence by resuscitation under favorable conditions, and subsequently cause infections. In this study, an assay combining loop-mediated isothermal amplification (LAMP) and propidium monoazide (PMA) treatment was developed for the detection and quantification of VBNC C. jejuni in agri-foods. PMA-qLAMP targeting the hipO gene demonstrated 100% high specificity to C. jejuni. A linear detection of C. jejuni was achieved between 8.77 × 102 and 8.77 × 07 CFU/mL with a coefficient of determination (R2) of 0.9956, indicating a good quantitative capacity. C. jejuni was effectively induced into the VBNC state by osmotic stress (i.e., 7% NaCl, w/v) over 48 h. VBNC C. jejuni cells were spiked into three representative food products and determined by PMA-qLAMP coupled with plating assay. The detection limits of PMA-qLAMP were 1.58 × 102 CFU/mL in milk, 3.78 × 102 CFU/g in chicken breast meat, and 4.33 × 102 CFU/g in romaine lettuce. PMA-qLAMP demonstrated rapid (25-40 min), specific (100% inclusivity and 100% exclusivity) and sensitive (~102 CFU/mL) determination of VBNC C. jejuni. This method can be applied in the agri-food industry to decrease the risks related to the consumption of contaminated agri-foods with pathogenic bacteria in the VBNC state and reduce the burden of C. jejuni infections to public health.
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